ID8小鼠卵巢癌细胞介绍及培养

简介^[1]

ID8小鼠卵巢癌细胞来源于小鼠卵巢癌组织，属于上皮细胞样的贴壁生长细胞，支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。

细胞培养 ^[1]

1)培养基及培养冻存条件准备:

1.准备DMEM培养基( DMEM, GIBCO, 货号11965-092) 90%，北美胎牛血清,10%。

2.培养条件:气相:空气，95%; 二氧化碳, 5%；温度: 37°C, 培养箱湿度为70%-80%。

3.冻存液: 90%血清，10% DMSO, 现用现配。液氮储存。

2)细胞处理:

复苏细胞:

将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均均。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代:

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞,传代可参下方法:

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml 消化液(0.25%trypsin-0.53mMEDTA) 于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

细胞冻存:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。

主要参考文献

[1] 俞晓毓  吴迪  王净  李菲  白绪乐  赵枫姝  窦骏  ；卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定。《中国组织工程研究》 2018年29期。