DNA修复蛋白NBS1抗体的应用

背景^[1-3]

DNA修复蛋白NBS1抗体是可以特异性结合DNA修复蛋白NBS1的一类多克隆抗体，主要用于检测DNA修复蛋白NBS1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

DNA修复蛋白NBS1在细胞对DNA损伤的反应和维持染色体完整性中起着至关重要的作用。DNA修复蛋白NBS1涉及双链断裂（DSB）修复，DNA重组，端粒完整性维持，细胞周期检查点控制和减数分裂。DNA修复蛋白NBS1具有单链核酸内切酶活性和双链特异性3'-5'核酸外切酶活性。NBN通过聚集PI3/PI4-激酶家族成员ATM，ATR以及可能的DNA-PKcs到DNA损伤位点并激活其功能来调节DNA损伤信号的感应。

DNA修复蛋白NBS1也可以通过与组蛋白H2AX的相互作用将MRE11和RAD50募集到DSB的附近。NBN还通过产生3'突出端在端粒长度维持中发挥作用，该3'突出端用作端粒酶依赖性端粒延长的引物。NBN是控制S阶段内检查点的主要参与者，并且有一些证据表明NBN参与了G1和G2检查点。

NBS1/MRN的作用包括DNA损伤传感器，信号传感器和效应器，使细胞能够维持DNA完整性和基因组稳定性。与RBBP8形成复合物，将DNA双链断裂感应与切除相联系使细胞能够维持DNA完整性和基因组稳定性。可与RBBP8形成复合物将DNA双链断裂感应与切除相联系。

应用^[4][5]

用于细胞周期检验点蛋白Nbs1的转录调控及功能研究

Nbs1是细胞应答DNA损伤时起重要作用的蛋白,特别是在应答DNA双链断裂时。它在DSB监测、DNA损伤应答、细胞周期检验点、DNA损伤的修复和DNA复制中都起到重要作用,对维持基因组的保真性和细胞的存活有重要贡献。

c-Myc是一个泛在性转录因子,在细胞中调控了大量的靶基因,影响许多细胞进程,包括了细胞增殖、生长、凋亡、能量代谢、分化等。c-Myc的表达失调与肿瘤发生和治疗密切相关,关于c-Myc对肿瘤细胞的药物敏感性的影响及其机制还有待阐明。

Nbs1的表达调控的机制和意义以及c-Myc对肿瘤细胞的药物敏感性与Nbs1和DNA修复机制的关系。研究证实了Nbs1是c-Myc的靶基因,存在于Nbs1启动子区的两个E-box序列对c-Myc结合是重要的。

实验结果也显示,组蛋白乙酰化酶p300参与Nbs1的表达调控,p300促进Nbs1的表达。染色质免疫沉淀表明c-Myc招募p300到Nbs1启动子,而且引起了Nbs1启动子区的组蛋白H4乙酰化。通过点突变和染色质免疫沉淀确定了Nbs1启动子区的两个E-box序列对c-Myc招募p300有重要作用。通过集落形成实验发现,过表达c-Myc和Nbs1都可以降低骨肉瘤细胞U2OS的阿霉素敏感性。

通过小RNA干涉和补偿实验发现c-Myc对阿霉素作用的影响与其调控Nbs1有关,增强DNA损伤修复能力可能是c-Myc影响阿霉素的疗效的一个重要因素。用小RNA干涉进行的集落形成实验结果也显示,要提高c-Myc高表达细胞的阿霉素敏感性,干涉Nbs1可能比直接干涉c-Myc更有效。对Nbs1的表达调控的机制的研究阐明了c-Myc调控Nbs1的机制,从DNA损伤修复角度说明了c-Myc对骨肉瘤细胞药物抗性的影响机制,为肿瘤的治疗提供了依据。

参考文献

[1]Epigenetic mechanisms in mammals[J].J.K.Kim,M.Samaranayake,S.Pradhan.Cellular and Molecular Life Sciences.2009(4)

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[4]Direct Reprogramming of Terminally Differentiated Mature B Lymphocytes to Pluripotency[J].Jacob Hanna,Styliani Markoulaki,Patrick Schorderet,Bryce W.Carey,Caroline Beard,Marius Wernig,Menno P.Creyghton,Eveline J.Steine,John P.Cassady,Ruth Foreman,Christopher J.Lengner,Jessica A.Dausman,Rudolf Jaenisch.Cell.2008(2)

[5]施寒清.细胞周期检验点蛋白Nbs1的转录调控及功能[D].东北师范大学,2010.