人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)水平。用纯化的人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人多免疫球蛋白受体(POLY-IGR)，再与HRP标记的人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)浓度。表面膜免疫球蛋白（Smlg）是B细胞的抗原识别受体，也是人类B细胞表面的特异标志之一。免疫缺陷疾病（如无丙球蛋白血症、联合免疫缺陷）时M-RFC降低明显，而EA－RFC、EAC－RFC亦降低。在慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病时，M-RFC、EA-RFC、EAC－RFC均显著升高。B细胞膜表面免疫球蛋白是B细胞膜表面的一种特征性的免疫球蛋白(surface membrane immunoglobulin，SmIg)。早期的前B细胞表达IgM，成熟的B细胞表达IgD、IgM或IgA、IgE等。用荧光标记羊抗人IgG、IgM、IgA、IgD或IgE抗体，分别与活性淋巴细胞反应，于荧光显微镜下观察呈显荧光的细胞(绿色为SmIg阳性的B细胞)。求出各类SmIg细胞的百分数，其总和为血液中B细胞的百分率。

应用^[4][5]

人细胞膜表面免疫球蛋白(SMIG)ELISA KIT用于CypA-CD147活化B细胞参与类风湿关节炎及急性B淋巴细胞白血病机制的探讨研究。

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性的自身免疫性疾病,虽然其确切的发病机制还不清楚,但普遍认为可能是由外源性或内源性的抗原对具有某些遗传易感背景的人触发一系列在滑膜中的自身免疫反应。其临床特点为累及周身关节的增殖性和侵蚀性滑膜炎,是类似于“局限性恶性肿瘤(locally invasive tumor)”的增生性和破坏性病变,呈进行性发展,自行缓解罕见。以往的研究证实了RA的滑膜细胞及巨噬细胞通过分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)对关节软骨的破坏及加重疾病的病情,而其中CD147分子则是已知的一个MMPs重要调节因子。CD147又称为细胞外基质金属蛋白酶诱导剂(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN),广泛表达于人血管内皮细胞、外周血细胞、造血系统起源的细胞表面,属于免疫球蛋白超家族,细胞环亲素A(yclophilin A,CypA)的受体之一。在RA关节腔内大量存在的CypA同样作为一个重要的促炎因子,在其他许多炎性及肿瘤等疾病中的作用都见报道,本实验室以往的研究显示CypA对RA滑液中的单个核细胞的趋化作用显著高于正常人外周血单个核细胞,且这一作用可被抗CD147抗体所阻断,提示了单个核细胞膜CD147分子可能参与了CypA对单个核细胞的趋化调节作用。但是到目前为止,对于CypA与CD147相互作用于淋巴细胞,尤其是B淋巴细胞的报道未曾见到。RA的滑膜下层可有大量的T细胞(CD4+细胞为主)、B细胞,巨噬细胞及浆细胞浸润,侵入的单个核细胞集聚在一起可形成淋巴样滤泡,少数发展成生发中心;生发中心的浆细胞有合成免疫球蛋白和RF的能力。

参考文献

[1]Sites and Stages of Autoreactive B Cell Activation and Regulation[J].Mark J.Shlomchik.Immunity.2008(1)

[2]Anticyclic citrullinated peptide antibodies:the footprint of autoreactive plasma cells in synovium?[J].Yoe Kie Onno Teng,Jacob M van Laar.Future Rheumatol..2007(6)

[3]Roles of CD147 on T lymphocytes activation and MMP‐9 secretion in Systemic Lupus Erythematosus[J].GinaPistol,CristianaMatache,AnaCalugaru,CrinaStavaru,StefanitaTanaseanu,RuxandraIonescu,SergiuDumitrache,MariaStefanescu.Journal of Cellular and Molecular Medicine.2007(2)

[4]Caveolin-1 up-regulates CD147 glycosylation and the invasive capability of murine hepatocarcinoma cell lines[J].Li Jia,Shujing Wang,Huimin Zhou,Jun Cao,Yichuan Hu,Jianing Zhang.International Journal of Biochemistry and Cell Biology.2006(9)

[5]李晓燕.CypA-CD147活化B细胞参与类风湿关节炎及急性B淋巴细胞白血病机制的探讨[D].第四军医大学,2008.