人Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA KIT的主要应用

背景^[1-3]

人Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA KIT是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒.固相夹心法酶联免疫吸附实验是已知α1-AGP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将α1-AGP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中α1-AGP的浓度呈比例关系。ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，还需要根据自身需要选择96孔板或是48孔板进行ELISA实验。

α1-酸性糖蛋白，生物学名词，早期称乳清类粘蛋白。分子量约40000，由肝脏合成，癌细胞也可合成。α1AG的肽链结构与Ig轻链可变区及部分重链区、结合珠蛋白α链结构类似，说明α1AG从Ig家系演变而来。

应用^[4][5]

人Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA KIT用于结核性胸腔积液与恶性胸腔积液的比较蛋白质组学研究。

由于胸腔积液邻近受损组织，在肺部相关疾病中其局部病理改变较其它体液应具有更高的敏感性及特异性，并且胸腔积液中富含血浆蛋白，炎性细胞、上皮细胞及肿瘤细胞等分泌的蛋白，这些蛋白可能有潜在的诊断价值。目前，蛋白质组学技术的兴起为寻找特异蛋白标志物提供了新的契机。方法：1.采用Label free定量蛋白质组策略对5例结核性胸腔积液与5例恶性胸腔积液进行蛋白质组分析检测；通过GO注释对定量比较蛋白组学鉴定的差异蛋白进行GO功能分类，利用KEGG软件寻找与鉴定差异蛋白关系最密切的病理通路。2.为进一步确认Label free定量结果的可靠性，应用蛋白质印迹法（Western blot）方法对部分差异蛋白的表达情况进行验证。3.应用酶联免疫吸附测定法（Elisa）对候选蛋白在50例结核性胸腔积液与30例恶性胸腔积液中进行初步临床验证，利用支持向量机进一步筛选候选差异蛋白以建立诊断模型，并判断该模型的诊断价值。利用Elisa方法，我们进一步对免疫球蛋白κ链C蛋白、补体C9、α2-HS-糖蛋白、维生素D结合蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白、激肽原1、粘蛋白2、α1酸性糖蛋白这9个候选蛋白在50例结核性胸腔积液与30例恶性胸腔积液样本中进行了临床验证。与恶性胸腔积液比较，免疫球蛋白κ链C蛋白、补体C9、α2-HS-糖蛋白、维生素D结合蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白在结核性胸腔积液中显著性高表达（P＜0.05）。

参考文献

[1]Laying the groundwork for proteomics:Mass spectrometry from 1958 to 1988[J].Klaus Biemann.Journal of Proteomics.2014

[2]Enhanced detection and desalting free protocol for phosphopeptides eluted from immobilized Fe(III)affinity chromatography in direct MALDI TOF analysis[J].Li Zhu,Jing Zhang,Yinlong Guo.Journal of Proteomics.2014

[3]Electrocardiogram Pattern Recognition and Analysis Based on Artificial Neural Networks and Support Vector Machines:A Review[J].Mario Sansone,Roberta Fusco,Alessandro Pepino,Carlo Sansone.Journal of Healthcare Engineering.2013(4)

[4]Proteomics of human prostate cancer biospecimens:the global,systems-wide perspective for Protein markers with potential clinical utility[J].Garbis,Spiros D,Townsend,Paul A.Expert Review of Proteomics.2013(4)

[5]张霞.结核性胸腔积液与恶性胸腔积液的比较蛋白质组学研究[D].北京市结核病胸部肿瘤研究所,2014.