BAX 抗体的生理功能与应用

背景^[1]

BAX抗体是以人工合成的Bax氨基端(Amino-terminal)的一段多肽为抗原制备而成的抗Bax单克隆抗体，是应用最广的Bax抗体。抗体类型为Mouse IgG1。Bax抗体可以检测内源性水平的Bax，未发现和其它Bcl-2家族蛋白有交叉反应。

Bax是一种促凋亡蛋白，上调Bax蛋白水平可以促进细胞凋亡。在通过线粒体应激诱导的细胞凋亡中Bax起关键作用。

生理功能^[2-3]

Bax可以形成寡聚体，然后从细胞浆中转移到线粒体膜上；通过和线粒体膜上的一些pore proteins相互作用，增强线粒体的通透性(permeability)；最后导致细胞色素c释放(cytochrome c release)、caspase-9激活以及后续的其它caspase激活和最终的细胞凋亡。Bax可以和Bcl-2形成多聚体，来调节线粒体膜的通透性，最终调节细胞的凋亡或存活。BAX是与BCL-2同源的水溶性相关蛋白，是BCL-2基因家族中细胞凋亡促进基因，BAX的过度表达可拮抗BCL-2的保护效应而使细胞趋于死亡。目前多和BCL-2一起用于肿瘤的研究。Bax的表达更为广泛，它可出现在肝细胞、肾小管上皮细胞、呼吸系上皮细胞和支气管平滑肌、血管平滑肌细胞中。bax基因是人体最主要的凋亡基因，属于bcl-2基因家族，编码的Bax蛋白可与Bcl-2形成异二聚体，对Bcl-2产生阻抑作用。研究发现Bax/Bcl-2两蛋白之间的比例关系是决定对细胞凋亡(Apoptosis)抑制作用强弱的关键因素，因此认为，bax是极重要的促细胞凋亡(Apoptosis)基因之一。

应用^[4][5]

用于bcl-2和bax对肝癌细胞凋亡的调控及肝癌凋亡相关单克隆抗体初步研究

建立乙醇诱导原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡模型的报道很少。bcl-2和bax分别是抑制细胞凋亡和促进细胞凋亡基因，并且同属于bcl-2基因家族。关于bcl-2和bax在肝癌的表达情况目前尚无定论。关于bax过表达对肝癌细胞凋亡的影响，以及bcl-2过表达对乙醇诱导的肝癌细胞凋亡的调控作用尚未见报道。制备抗肝癌凋亡细胞的单克隆抗体（mAb）能够探讨细胞凋亡相关分子表达的变化和产生情况，并且可能用于细胞凋亡的检测，是目前细胞凋亡研究中较新的探索性领域。

乙醇诱导肝癌细胞凋亡及其Bax和Bcl-2的表达情况、转染bcl-2和bax对肝癌细胞凋亡及其细胞周期蛋白p21WAF1/CIP1和p27Kip1表达的影响和抗乙醇诱导的肝癌凋亡细胞mAb的制备进行以下几个方面的工作：①用噻唑蓝（MTT）法检测浓度分别为20～100mL/L的乙醇作用6h对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用。然后用60mL/L乙醇作用6h诱导其发生凋亡，以台盼蓝染色、苏木精-伊红（HE）染色、May-Grunwald-Giemsa（MGG）染色、Hoechst 33258染色、吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）双染色、透射电子显微镜观察、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测和流式细胞仪分析不同细胞周期DNA含量等方法检测细胞凋亡的发生情况。

用免疫细胞化学ABC法染色和图像定量分析检测诱导凋亡前后细胞的Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果显示，随着乙醇浓度的增加，其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强。60mL/L乙醇作用6h可使HCC-9204细胞发生明显的凋亡形态学变化，并且大部分细胞为台盼蓝拒染和TUNEL阳性着色。流式细胞仪分析可见明显的亚二倍体凋亡峰。诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax的表达水平明显增高（P＜0.05），而Bcl-2在诱导凋亡前后均未见表达。②用免疫组织化学ABC法检测Bcl-2和Bax在肝癌和正常肝组织的表达情况，并分析其与肝癌组织病理分级之间的关系。

参考文献

[1]Cytotoxicity of millimolar concentrations of ethanol on HepG2 human tumor cell line compared to normal rat hepatocytes in vitro[J].F.Casta?eda,R.K.H.Kinne.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2000(9)

[2]Short exposure to millimolar concentrations of ethanol induces apoptotic cell death in multicellular HepG2 spheroids[J].F.Casta?eda,R.K.H.Kinne.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2000(6)

[3]Protein expression of p53,p21(WAF1/CIP1),bcl-2,Bax,cyclin D1 and pRb in human colon carcinomas[J].I.K.Bukholm,J.M.Nesland.Virchows Archiv.2000(3)

[4]Enhancement of HLA-DR expression in human hepato-cellular carcinoma with interferon[J].Yang Lianjun,Sui Yanfang,Chen Zhinan.Chinese Journal of Cancer Research.1999(4)

[5]杨连君.bcl-2和bax对肝癌细胞凋亡的调控及肝癌凋亡相关单克隆抗体初步研究[D].第四军医大学,2001.