人溴脱氧核苷尿嘧啶(BRDU)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人溴脱氧核苷尿嘧啶(BRDU)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)水平。用纯化的人溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)，再与HRP标记的溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)浓度。

目前常用的细胞增殖标记物有4种，DNA聚合酶α（DNA polymeraseα），增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA），Ki-67和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在，应用相对较广。Brdu，也称为溴化去氧尿苷，一种合成的胸苷类似物，在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂，凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载，然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记，ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外，还能同时结合其它细胞标记物，双重染色，来判断增殖细胞的种类，增殖速度等，对研究细胞动力学有着重要意义。

应用^[4][5]

人溴脱氧核苷尿嘧啶(BRDU)ELISA KIT用于尿嘧啶脱氧核苷和Resovist双标记骨髓基质细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究。

骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是骨髓内的一种多潜能干细胞,在一定的条件下,可以分化为神经细胞。而且它可以直接从个体骨髓中获得,来源充足,取材方便,且避免伦理学的束缚。因此BMSCs是治疗帕金森病理想的种子细胞。帕金森病黑质多巴胺能神经元变性的原因目前还不明确,然而大量的研究资料提示,其主要与氧化反应增强、线粒体功能异常等因素有关。谷胱甘肽作为脑内最重要的抗氧化剂,PD中还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量降低,并与其疾病的严重程度相关。应用GSH治疗早期PD已取得了一定的疗效。体外实验表明GSH可诱导BMSCs分化为神经组织细胞。应用尿嘧啶脱氧核苷(Bromodeoxyuridine,Brdu)和Resovist双标记不同数量的BMSCs移植PD大鼠纹状体内,应用MRI对其进行活体示踪观察,免疫组化检测BMSCs在脑内的迁移及细胞的分化。并通过GSH干预,探讨联合应用骨髓基质细胞和还原型谷胱甘肽治疗帕金森病大鼠的疗效和机制。

部分尿嘧啶脱氧核苷和Resovist双标记骨髓基质细胞移植帕金森病大鼠后细胞迁移范围研究目的:观察Brdu及Resovist双标记不同数量BMSCs单点移植入PD大鼠受损纹状体内,通过阿朴吗啡诱发旋转试验评价移植数量,通过磁共振活体示踪、免疫组化检测BMSCs在脑内的迁移范围。方法:体外分离培养SD大鼠BMSCs,经Brdu和Resovist双标记后移植PD大鼠脑内。根据每注射点细胞数量及细胞是否铁标记,36只PD大鼠随机分成5组:1.0×105标记细胞组(n=8)、1.5×105标记细胞组(n=8)、2.0×105标记细胞组(n=8)、2.5×105标记细胞组(n=8)和对照组(n=4)。移植前1周和移植后1、4、8周进行阿朴吗啡诱发旋转试验和MRI动态示踪,第9周处死大鼠,进行Brdu免疫组化确定移植后细胞迁移范围。结果:(1)阿朴吗啡诱发旋转试验:2.0×105移植组阿朴吗啡每分钟旋转次数降低幅度,与对照组相比差别有统计学意义(P<0.05)。

参考文献

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[2]Oxidative and nitrative protein modifications in Parkinson’s disease[J].Steven R.Danielson,Julie K.Andersen.Free Radical Biology and Medicine.2008(10)

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[4]S-glutathionylation in protein redox regulation[J].Isabella Dalle-Donne,Ranieri Rossi,Daniela Giustarini,Roberto Colombo,Aldo Milzani.Free Radical Biology and Medicine.2007(6)

[5]王兰.尿嘧啶脱氧核苷和Resovist双标记骨髓基质细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究[D].苏州大学,2009.