小鼠B细胞杂交瘤细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠B细胞杂交瘤细胞是一种在制备单克隆抗体过程中，用骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合而成的细胞。杂交瘤细胞一般通过瘤细胞培养来制备。

杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠细胞与小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有b细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞，这种杂种细胞叫做杂交瘤细胞。

脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。

细胞融合物中包含：

脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。

骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。

骨-脾融合细胞：在HAT中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。

应用^[4][5]

用于鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究

制备鼠抗人GL50分子的单克隆抗体并对其进行相关生物学特性的鉴定；利用自主研制的GL50mAb，研究ICOS／GL50信号途径在机体体液免疫应答和肿瘤免疫中的生物学作用。

实验方法：(1)以天然高表达人GL50分子的B淋巴瘤Daudi细胞为免疫原免疫Balb／C小鼠；

(2) 采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合；

• 以人GL50-L929、VK-L929转基因细胞为目的单抗的筛选细胞，通过间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞株进行筛选；
• 单抗标记生物素，通过竞争抑制实验检测单抗识别抗原位点的情况；
• 采用常规方法制备染色体，分析杂交瘤细胞核型；
• 采用免疫亲和层析纯化腹水型单抗；
• 快速试纸鉴定单抗类型；
• 采用间接免疫荧光标记法测定单克隆抗体的效价，并检测单抗在不同细胞株和细胞上的表达；
• Western-blotting实验检测单抗与Daudi细胞和GL50-L929转基因细胞GL50膜蛋白的结合能力；
• 免疫组织化学检测单抗对不同组织中GL50分子的识别能力；
• 采用~3H-TdR法，利用自行制备的GL50mAb并结合GL50-L929转基因细胞，研究ICOS／GL50信号途径在活化T细胞体外增殖中的作用；

(12)采用ELISA法检测GL50-L929和自行制备的GL50mAb对活化T细胞分泌细胞因子IL-2和IL-10的影响，并检测ICOS-L929和GL50mAb对PWM介导的B细胞分泌抗体的生物学效应；

参考文献

[1]ICOS is critical for CD40-mediated antibody class switching.McAdam AJ,G-reenwald RJ,Levin MA,et al.Nature.2001

[2]ICOS co-stirnulatory receptor is essential for T-cell activation and function.Dong C,Juedes AE,Temarm UA,et al.Nature.2001

[3]ICOS+Th cells produce distinct cytokines in different mucosal immune responses.Bonhagen K,Liesenfeld O,Stadecker MJ,et al.European Journal of Immunology.2003

[4]ICOS is an inducible T-cell co-stimulator structurally and functionally related to CD28.Hutloff A,Dittrich AM,Beier KC et al.Nature.1999

[5]朱伟.鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的初步研究[D].苏州大学,2004.