昆虫细胞专用胎牛血清的应用

背景^[1-3]

昆虫细胞专用胎牛血清是昆虫细胞体外培养专用血清，是以健康新生胎牛血液为原料加工而成，经无菌采集、分离、微孔过滤分装而成。昆虫细胞专用胎牛血清无支原体、无牛病毒、无噬菌体，低内毒素，最终过滤孔径0.1u。

血清在昆虫细胞培养时的作用：

1、主要作用提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素。生长因子包括胰岛素，胰岛素样生长因子，表皮生长因子，成纤维细胞生长因子，血小板衍生生长因子等。激素有皮质醇，雌二醇，睾酮。黄体酮和甲状腺等。

2、提供有利于细胞所需的贴付因子和伸展因子。正如前面所提到的多刷细胞为贴壁细胞，他们必须贴付在某种载体上才能生长，血清可提供所需的贴付因子呢和伸展因子，如纤维结合蛋白，如姑苏，昆布氨酸和胶原等

3、提供可识别金属，激素，维生素和脂类的结合蛋白，如白蛋白可与维生素，脂类和激素结合，并将它们带入细胞，贴传递蛋白可结合和传送铁离子。他们还可消除某系毒素和金属的毒性作用。

4、提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素。脂肪酸中磷脂酶、胆固醇和前列腺E等，他们可能与其他生长因子结合后起作用。微量元素中有铜锌钴钼硒等，他们对酶有激活作用，并可保护自由基第DNA的损害

应用^[4][5]

用于鳞翅目昆虫胚胎细胞系的建立和高蛋白表达细胞克隆株的研究

以重要农业害虫-棉铃虫(Helicoverpa armigera)和粘虫(Mythimna separata)为材料建立新细胞系,并对其生物学特性进行研究,丰富了有限的昆虫细胞系资源,为离体条件下进行昆虫生理生化、杆状病毒感染和细胞凋亡机制的研究提供实验材料;

同时对本实验室建立的高产悬浮性粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)胚胎细胞系QB-Tn9-4s进行克隆,从中筛选高蛋白表达的克隆株,进行无血清培养驯化,并阐明其生物学特性,为昆虫细胞这一新型生物反应器的深入研究和开发奠定基础。

由棉铃虫胚胎组织建立了两株细胞系,分别命名为QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5,在含10%胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代60余代。两株细胞系均以圆形和短梭形细胞为主;

DAF和RAPD鉴定结果表明两株细胞系均来源于棉铃虫胚胎;染色体均为典型的鳞翅目昆虫细胞染色体特征;QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5的第30代细胞群体倍增时间分别为63.7 h和66.9 h。

两株细胞系均能被棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)感染,4 d的感染率分别为86.6%和56.5%;对甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)核型多角体病毒(MbNPV)7 d的感染率均为15%左右;

但对苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcMNPV)侵染的反应不同,DAPI染色和基因组DNA电泳结果表明,AcMNPV可诱导QB-Ha-E-5细胞发生凋亡,极少数细胞内可形成病毒多角体,但不能诱导QB-Ha-E-1细胞发生凋亡,其感染率为55.3%,两株细胞系均可被1.25μg/mL的放线菌素D诱导发生凋亡。

参考文献

[1]Insect cell culture and applications to research and pest management[J].Guy Smagghe,Cynthia L.Goodman,David Stanley.In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal.2009(3)

[2]A cell strain cloned from Spodoptera exigua cell line(IOZCAS-Spex-II)highly susceptible to S.exigua nucleopolyhedrovirus infection[J].Huan Zhang,Yong-an Zhang,Qilian Qin,Xuan Li,Lin Miao,Yuzhu Wang,Liangjian Qu,Aijun Zhang,Qing Yang.In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal.2009(5)

[3]A new insect cell line from the longicorn beetle Plagionotus christophi(Coleoptera:Cerambycidae)[J].Keita Hoshino,Mami Hirose,Kikuo Iwabuchi.In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal.2009(1)

[4]Effect of Conditioned Medium Factors on Productivity and Cell Physiology in Trichoplusia ni Insect Cell Cultures[J].Biotechnol Progress.2008(3)

[5]郑桂玲.鳞翅目昆虫胚胎细胞系的建立和高蛋白表达细胞克隆株的研究[D].山东农业大学,2010.