苦瓜苷B的制备和生物活性

背景及概述^[1]

苦瓜，又名凉瓜，是葫芦科苦瓜属的一种攀缘植物，广泛种植于热带和亚热带地区，是人们生活中的一种常见蔬菜，在医药上有明目、助消化、清凉解毒、利尿和治疗糖尿病等功效，因此素有“药用蔬菜”之称。现代研究表明苦瓜中皂苷如苦瓜苷B和多糖是其发挥降糖作用的主要活性成分，因此，建立苦瓜苷B和多糖的提取工艺技术，对指导苦瓜的精深加工及其功能食品研制具有重要意义。

制备^[1]

苦瓜皂苷制备工艺主要包括以下步骤：

(1)配制异丙醇/(NH4)₂SO₄双水相体系：称取53.655g(NH4)₂SO₄于500mL反应锥形瓶中，加入185.71g0.01mol/LPBS缓冲液(pH＝7.0)，振摇使(NH4)2SO4溶解，再加入110.635g异丙醇，震荡混匀后静置分层；

(2)制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖粗提液：称取5g干燥的苦瓜粉于350g异丙醇/(NH4)₂SO₄双水相体系中，震荡混匀，使用CW-2000型超声-微波协同萃取/反应仪进行提取。超声波功率为50W，微波功率为800W，提取时间为15min，提取温度为70℃，待提取结束后，4000rpm离心10min分离上下相，得到苦瓜皂苷粗提液(上相)和苦瓜多糖粗提液(下相)；

(3)制备苦瓜皂苷提取液：将苦瓜皂苷粗提液用旋蒸仪于83℃旋转蒸发至无醇味(旋蒸过程中加适量双蒸水)，制得苦瓜皂苷提取液；

(4)制备苦瓜皂苷精提液：将苦瓜皂苷提取液进一步通过AB-8型大孔树脂静态吸附纯化，制得苦瓜皂苷精提液。大孔树脂纯化苦瓜皂苷的具体步骤是首先为静态吸附：取5g预处理好的大孔树脂，将其倒入装有150mL苦瓜皂苷提取液的250mL锥形瓶中，于25℃恒温振荡器中以160r/min震荡8h。然后进行静态解吸：用双蒸水冲洗大孔树脂，待洗至用苯酚-硫酸法检测不显红色为止，抽滤至干，将大孔树脂倒入装有150mL无水乙醇的锥形瓶中，于25℃恒温振荡器中以160r/min震荡1h。过滤除去大孔树脂后将醇溶液在80℃下旋转蒸发至无醇味(旋蒸过程中加适量双蒸水)，即制得苦瓜皂苷精提液；

(5)冷冻干燥制备淡黄色粉末状苦瓜皂苷成品，其中包括苦瓜苷B。

生物活性^[2]

苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜苷B对亚洲玉米螟Ostrinina furnacalis幼虫血细胞(Ofh)细胞有明显的增殖抑制作用,36 h后的IC50值分别为7.566,24.340及8.514μg/m L,苦瓜素Ⅰ及苦瓜苷B对Ofh细胞的增殖抑制作用明显强于苦瓜素Ⅱ及对照药物印楝素A。苦瓜素Ⅰ和苦瓜苷B处理后的Ofh细胞表现为体积膨大、表面变得粗糙并有明显的空泡现象,严重破坏了Ofh细胞的形态结构。进一步的研究结果表明,8μg/m L的苦瓜素Ⅰ及苦瓜苷B处理Ofh细胞12~48 h,细胞死亡率均高于对照组,呈一定的时间依赖关系,说明苦瓜素Ⅰ对Ofh细胞的急性毒力高于苦瓜苷B。Ofh细胞经AO/EB染色后,用荧光显微观察发现,苦瓜素Ⅰ和苦瓜苷B处理组细胞膜破裂,细胞核受损严重,细胞呈不均匀桔黄色-橙红色荧光,呈典型的坏死特征。流式细胞仪检测结果表明,苦瓜素Ⅰ和苦瓜苷B对Ofh细胞具有明显的致坏死作用。8μg/m L苦瓜素Ⅰ和苦瓜苷B处理Ofh细胞36 h后,总坏死率分别为74.92%±2.02%和49.77%±1.69%。综上，苦瓜素Ⅰ和新化合物苦瓜苷B对Ofh细胞均具有有效的增殖抑制和致坏死作用,这可能是苦瓜素类化合物对亚洲玉米螟的拒食作用及抑制其生长发育和生殖力的主要机制之一。

参考文献

[1] CN201810243490.6 一种具有降糖活性的苦瓜皂苷和多糖双水相一步提取方法

[2]罗剑峰,刘欢,郭子俊,王国才,凌冰.苦瓜素Ⅰ和苦瓜苷B对亚洲玉米螟Ofh细胞的增殖抑制和致坏死作用[J].昆虫学报,2016,59(10):1093-1102.