大鼠表皮角化细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠表皮角化细胞分离自大鼠表皮组织，大鼠表皮角化细胞主要分布于表皮基底层，在上皮程序性死亡后，细胞产生角化并移向表皮。体外培养的表皮角化细胞容易导致终末分化，不能充分增殖。表皮覆盖皮肤和粘膜表面，作为机体抵抗外界刺激的道防御性屏障，具有其他器官不可替代的重要生理功能。角质形成细胞可产生粘附分子和细胞因子，与天然免疫和体内稳态相关。角化是角朊细胞的一个重要特征。从基层细胞开始，角朊细胞不断分化，向上移行，经历棘层、颗粒层，最终成为角层细胞而完成其角化过程。

人类表皮最下层的基底层细胞先后变为多角形的棘细胞、扁平含有嗜碱性颗粒的颗粒细胞、扁平的无细胞核及细胞器的角质细胞。这一过程一般需要28至45天。表皮的分化过程受多方面因素的控制，很易被干扰。凡能引起基底细胞分裂和分化的因素都可引起角化过度和角化不全。角质形成过度或角质堆积，可使角质层角化过度。角化过程不完全或角化异常，导致角化不全及角化不良。形成皮肤角化过度的症状。

应用^[4][5]

用于NB-UVB对角质形成细胞角蛋白17表达的调控作用及其机制研究

银屑病是一种临床常见的易复发的慢性炎性皮肤病，其发病率较高，全球发病率约为0.1-4.0%。

目前银屑病的发病机制尚不十分明确，与环境和遗传等多种因素有关。以往研究发现银屑病相关角蛋白17（K17）在银屑病皮损区呈特异性高表达，并且通过“K17-T细胞-细胞因子”自身免疫环路的形式参与银屑病的发病和疾病的进展。

窄谱中波紫外线（NB-UVB）是临床常用的治疗银屑病的方法，具有安全、有效、副作用小的特点。

通过体内及体外实验探讨不同剂量NB-UVB对角质形成细胞K17表达的调控作用及其机制。

方法不同剂量NB-UVB照射角质形成细胞细胞系，照射后培养12h用AnnexinV/PI检测细胞凋亡，照射后6、12、24h用CCK8法测定细胞活性，透射电镜观察细胞骨架变化，Real-time PCR和Western-blot用于检测K17mRNA和蛋白表达影响以及其对ERK1/2、STAT3、STAT1、P38、AKT、P65磷酸化活性的影响；

分离培养原代角质形成细胞，采用荧光实时定量PCR、Western印迹以及K17免疫荧光等方法对以上结果进行验证；

采用咪喹莫特诱导银屑病样皮炎小鼠模型，H&E染色检测不同剂量NB-UVB照射后表皮病理变化，荧光实时定量PCR、Western印迹、K17免疫荧光和免疫组化检测NB-UVB对小鼠表皮组织K17mRNA和蛋白表达的影响。

参考文献

[1]Molecular mechanism of polypeptides from Chlamys farreri(PCF)’s anti-apoptotic effect in UVA-exposed HaCaT cells involves HSF1/HSP70,JNK,XO,iNOS and NO/ROS[J].Xiaowen Wang,Qixiao Jiang,Wencheng Wang,Li Su,Yantao Han,Chunbo Wang.Journal of Photochemistry&Photobiology,B:Biology.2014

[2]UVB-induced anti-survival and pro-apoptotic effects on HaCaT human keratinocytesvia caspase-and PKC-dependent downregulation of PKB,HIAP-1,Mcl-1,XIAP andER stress[J].Yu-Kyoung Park,Byeong-Churl Jang.International Journal of Molecular Medicine.2014(3)

[3]Disseminated molluscum contagiosum in a patient on methotrexate therapy for psoriasis[J].Shivani Bansal,Vineet Relhan,Esha Roy,Vijay Garg,Nita Khurana.Indian Journal of Dermatology,Venereology,and Leprology.2014(2)

[4]Keratin 17:A Critical Player in the Pathogenesis of Psoriasis[J].Liang Jin,Gang Wang.Med.Res.Rev..2014(2)

[5]韩昌旭.NB-UVB对角质形成细胞角蛋白17表达的调控作用及其机制研究[D].第四军医大学,2014.