ASPC-1细胞的应用

ASPC-1细胞的简介^[1]

ASPC-1细胞来源于人胰腺癌病人的腹水中的细胞裸鼠异种移植产生的癌性腹水，可以表达CEA，人胰腺相关抗原、人胰腺特异性抗原和黏蛋白。

ASPC-1细胞细胞传代^[1]

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；

ASPC-1细胞细胞冻存^[1]

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

ASPC-1细胞细胞复苏^[1]

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含6ml 完全培养基的15ml 离心管中， 1000rpm 离心5min；

3）弃上清，沉淀用6ml完全培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO₂ 细胞培养箱中培养；

主要参考文献

[1] 刘智文 肖卫东 李勇 文武 王福飞；胰腺癌AsPC-1细胞中miR-148a/b靶基因DNA甲基转移酶1的鉴定。《中华实验外科杂志》