嗪氨灵的残留检测

背景及概述^[1]

嗪氨灵又称嗪胺灵，是杂环类杀菌剂。原药白色无味结晶，几乎不溶于水、碱和酸中。嗪氨灵在氯仿、芳香烃中溶解度很小，稍溶于甲醇和酮类。嗪氨灵在二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮的溶解度为30%和40%。嗪氨灵属于内吸性杀菌剂，用于防治由白粉菌、锈菌、黑星菌等引起的禾谷类锈病和苹果黑星病，禾谷类、苹果、葫芦科白粉病等病害。嗪氨灵以根部浇灌比叶面喷洒效果好，亦用于禾谷类作物拌种处理。它对菌的作用是抑制甾醇的生物合成，干扰膜的生成。嗪氨灵在植株体内它损害白粉菌吸器，而不影响孢子萌芽。嗪氨灵对植物安全，对人畜低毒，小鼠急性口服LD₅₀>6000mg/kg，把鱼放入50mg/kg溶液中，无中毒表现，对蜜蜂也无毒性。

残留检测^[2]

嗪氨灵是一种酰胺类内吸杀菌剂，广泛用于对粮谷、果树和蔬菜中白粉病、锈病和黑星病的防治。由于它能够破坏动物体内的血红细胞，许多国家对它的最高残留限量都有严格规定:欧盟已严格制定了505种食品中嗪氨灵的残留量，且最为严苛，范围为0.01～0.05mg/kg;日本规定了193种食品中嗪氨灵的残留量。王敬等人参考国内外文献方法，对样品的提取及净化进行了优化，根据国内外对嗪氨灵残留量的要求，选择了几种有代表性的基质如粮谷、豆类、水果、蔬菜和食用菌等作为检测对象，采用液相色谱－串联质谱法作为分析手段，建立了植物源食品中嗪氨灵残留量的检测方法，方法简单快速、灵敏度高，能够满足国际上日益严格的农药残留量的检测要求。

1.材料与仪器

嗪氨灵(分子式为C10H14Cl6N4O2，CASNo.26644－46－2，纯度≥99%)德国Dr.Ehrenstorfer公司;乙腈、甲酸、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷色谱纯，美国Sigma公司;甲苯、无水硫酸钠和氯化钠分析纯，北京化学试剂公司;PSA固相萃取柱(1000mg，6mL)、石墨化炭黑/氨基固相萃取柱(500mg/500mg，6mL)、石墨化碳黑固相萃取柱(1000mg，6mL)美国Supelco公司;C18固相萃取柱(1000mg，6mL)、QuEChEＲS提取管(内含1.5g无水硫酸钠和6g无水硫酸镁)、QuEChEＲS净化管(内含150mg无水硫酸钠镁，50mgPSA，50mgC18)美国Waters公司;J2ScientificMPSGPC(装有22gS－X3Bio－Beads填料，粒径38～75μm)美国J2Scientific公司;实验用水超纯水。ThermoTSQQuantumUltra液相色谱－串联质谱仪(配电喷雾离子源)美国ThermoFisher公司;旋转蒸发器德国Heidolph公司;PT3100型均质器瑞士Kinematica公司;TurboVapLV型氮吹浓缩仪美国Zymark公司;ML204/02分析天平梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司;CＲ22GIII型高速冷冻离心机日本HITACHI公司;固相萃取柱装置美国Waters公司;Milli－Q纯化系统美国Millipore公司。

2.标准溶液的配制

2.1标准储备液精密称取嗪氨灵标准品10mg置于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液，置于棕色试剂瓶中，4℃避光保存。

2.2标准工作溶液准确吸取适量标准储备液，用乙腈配制成系列标准工作溶液，现用现配。

2.3辣椒和蘑菇基质空白标准工作溶液准确吸取适量标准储备液，用辣椒和蘑菇样品空白提取液(由3步骤所得)配制成系列基质空白标准溶液，现用现配。

3.样品前处理方法

3.1提取苹果、葡萄、菠菜、番茄、甘蓝、黄瓜和蘑菇:称取试样约4g(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入5g氯化钠(既可以促使有机相与水相分层，降低待测物在水相中的溶解度，又可在均质过程中起到研磨的作用，提高提取效率)，20mL乙腈，15000r/min均质提取2min，4000r/min离心10min，将上清液经装有10g无水硫酸钠的漏斗过滤至120mL鸡心瓶中。再用20mL乙腈重复提取1次，合并提取液于同一鸡心瓶中，于45℃水浴浓缩至近干，待净化。大米、玉米、小麦、大豆和辣椒:称取试样约4g(精确到0.01g)于50mL离心管中，加10mL水润湿样品，混匀2min，静置30min后处理方法与苹果、葡萄等样品相同。

3.2净化用2mL乙腈－甲苯(7+3，V/V)溶解上述步骤中所获得的浓缩液，过石墨化炭黑/氨基固相萃取柱(使用前用10mL乙腈－甲苯(7+3，V/V)预淋洗)，再用3mL乙腈－甲苯(7+3，V/V)溶液分3次洗脱，控制流速为0.5mL/min，收集全部流出液，于45℃氮气吹干。用1.0mL乙腈溶解，过0.22μm有机相微孔滤膜后，待测。

4.仪器条件

色谱柱:ThermoHyperisilGOLDC18色谱柱(100mm×2.1mm，5μm);进样量:10μL;柱温:30℃;流动相:A相为0.2%甲酸水溶液，B相为乙腈;流速:300μL/min;梯度洗脱程序如下:0～4.0min，15%B～85%B;4.0～7.0min，85%B;7.0～7.01min，85%B～15%B;7.01～10.0min，15%B。电离方式:电喷雾正离子源(ESI+);检测模式:MRM;毛细管电压:3.5kV;离子源温度:150℃;去溶剂温度:350℃;鞘气(N2)压力:241.3kPa;辅助气(N2)压力:55.1kPa;定量离子对435.0＞389.8(碰撞能量:22V)，定性离子对435.0＞214.9(碰撞能量:25V)。

实验以不含嗪氨灵农药的大米、玉米、小麦、大豆、苹果、葡萄、黄瓜、番茄、甘蓝、菠菜、蘑菇和辣椒为空白样品基质，在不同添加水平上进行加标回收率实验，其结果见表 2。从表 2 可看出，每个水平重复做 10 次，测得方法的回收率范围为 68.4%～109.0%，相对标准偏差(RSD) 为4.38% ～13.5%，符合规定的要求。

应用本方法对市售的 40 份蔬菜、40 份水果和 10 份粮谷样品进行测定， 并对实际样品进行了加标回收测定。结果在 1 批次菠菜中检出5.6 μg /kg的嗪氨灵，2 批次甘蓝和 1 批次蘑菇中检出嗪氨灵，浓度在 6.2～16.7 μg /kg之间，均低于 GB 2763－2014《食品安全国家标准食品中农药残留限量》的要求。

参考文献

[1]农业大词典

[2]王敬,马育松,赵中辉,代汉慧,张海超.固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定植物源食品中嗪氨灵的残留量[J].食品工业科技,2017,38(02):84-88.