超快蛋白银染试剂盒使用说明书

超快蛋白银染试剂盒简介^[1]

蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain kit)堤一种快速的可用于 SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。

优点

1、操作简单、快速;

2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测;

3、目的条带清晰;

4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit相比，前者操作速度更快，但检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。

试剂盒组成

操作步骤^[1]

1、 准备工作:以下操作以8.5X5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例， 以凝胶全部浸没到溶液为准，-般用量是25ml,对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60~70rpm。提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。

2、水洗: 电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。

3、固定: 取凝胶放入50~100ml固定液中，在摇床上室温摇动15~20min,重复固定步骤1次。

4、洗脱: 取凝胶放入洗涤液中清洗2次，每次5min.

5、 水洗:去离子水清洗凝胶2次，每次5min。

6、增敏: 配制银染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer (500X) 0. 1ml加入到50ml去离子水中，混匀，即1XSi1ver Stain Sensitizer, 一般应2h内用完。室温下用1XSi1ver Stain Sensitizer孵育凝胶2min,立即用去离子水清洗凝胶2次，每次1min。

7、 银染:配制银染工作液，即取Silver Stain(100x)0. 5ml加入到50ml去离子水中，混匀，即得1XSilver Stain， 一般应2h内用完。取凝胶入1XSilver Stain, 在摇床上室温摇动10~20min.

8、 水洗:弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶2次，每次30s， 摇动速度在60~70rpm.总的水洗时间应控制在1. 5min内。

9、显影:配制银染显影工作液，即取Silver Stain Developer(5X)10ml加入到40ml去离子水中，混匀，即1XSilver Stain Developer, -般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1XSilver Stain Developer 中，室温孵育2~10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2~3min,亦可延长至5min以上，如果显影效果不佳，可重新更换1XSi1ver Stain Developer继续显影。

10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上摇动10min，以终止显色反应。(配制银染终止液，即取Silver Stain Stop Buffer (10 X)10ml加入到40ml去离子水中，混匀，即1XSilver Stain Stop Buffer，-般应24h内用完。)

11、保存:弃终止液，加入去离子水50ml, 摇床上摇动2~5min, 弃液。短期保存于新鲜去离子水，长期保存可以制备干胶。

主要参考文献

[1] 陈宏  王振英  靳阳  陈莹  付富友  彭永康  ；用超敏感银染SDS-PAGE方法绘制黄瓜、菜豆蛋白质指纹图谱。《华北农学报》 2000年04期。