DIP13Β抗体的应用

背景^[1-3]

DIP13Β抗体是一类可以特异性结合DIP13Β的多克隆抗体，主要用于检测DIP13Β的免疫组化、ELISA等实验。APPL蛋白（DIP13）,包括APPL1和APPL2（DIP13Β）,是细胞膜与细胞核之间重要的信息传递者,同时也为细胞增殖所必需。APPL蛋白包括BAR结构域(bin-amphysin-rvs),PH结构域(pleckstrin homology)和PTB结构域(phosphotyrosine binding),且均可与一系列不同的信号分子相互作用,从而发挥传递信号的作用。APPL蛋白仅存在于真核生物中,至今已发现APPL1和APPL2两种亚型,两者在一级序列上有54%的同源性。

APPL1最早是通过酵母双杂交筛选,发现可以与丝氨酸/苏氨酸激酶AKT2相互作用。随着对APPL蛋白研究的发展,不断有新的理论和发现被报道出来。比如,APPL1被发现可以与多功能抗凋亡激酶AKT2的非活性形式相互作用。然后后来发现非活性形式AKT主要存在于胞质溶胶中,因此AKT2似乎不大可能与APPL蛋白共定位于内涵体。

另外,肿瘤抑制蛋白(deleted in colorectal carcinoma,DCC)也是APPL1另一个相互作用因子。在配体不存在的情况下,DCC通过对半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶9(caspase-9)的激活介导了细胞凋亡,而这一过程正是需要APPL1的参与。

DCC通过APPL1的作用,可以激活p53,这是NuRD/MeCP1复合体的组成部分。p53的激活会导致细胞生长的停止或者凋亡,虽然这也依赖于不同条件对下游转录信号的刺激。另外,DCC还可以通过介导在神经细胞内的信号通路。另外,APPL1和APPL2被证明都可以通过PTB结构域与胞吞作用调节因子Rab5相互作用。

应用^[4][5]

用于人类APPL2蛋白PTB结构域的表达纯化及其功能的研究

APPL2不但可与FSHR相互作用,而且可以与APPL1通过BAR结构域在N端形成二聚体。PTB结构域通过与磷酸化酪氨酸的结合,在多个信号通路上发挥关键作用。然而,这种结合也可以不依赖于磷酸化酪氨酸。APPL蛋白的PTB结构域包括两个反向平行β折叠片和三个α螺旋,这与葡萄糖转运因子GLUT2和促进凋亡细胞吞食的蛋白因子CED-6有相似性。尽管APPL1和APPL2在PTB结构域上显示了较高的序列同源性,但有些蛋白已经被证实只与APPL1结合,这表明两者可能以不同,甚至拮抗的方式发挥作用。因此,确定APPL2的相互作用分子有相当的重要性。

在大肠杆菌表达体系中,表达并纯化了人类APPL2(human APPL2,hAPPL2)蛋白PTB结构域,然后以此为靶标,利用噬菌体展示技术筛选相互作用肽段。经过三轮筛选,随机挑取48个噬菌体单克隆,进行ELISA分析。7肽序列ERLPFFY和YLTSPKH被证明能与PTB结构域特异地结合。对P3-GST的野生型和将每个氨基酸突变为丙氨酸的突变型的ELISA检测,显示每个氨基酸均是结合所必需的。

参考文献

[1]Membrane Targeting by APPL1 and APPL2:Dynamic Scaffolds that Oligomerize and Bind Phosphoinositides[J].Heidi J.Chial,RupingWu,Carolyn V.Ustach,Linda C.McPhail,William C.Mobley,Yong Q.Chen.Traffic.2008(4)

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[4]Rab Conversion as a Mechanism of Progression from Early to Late Endosomes[J].Jochen Rink,Eric Ghigo,Yannis Kalaidzidis,Marino Zerial.Cell.2005(5)

[5]梁宁.人类APPL2蛋白PTB结构域的表达纯化及其功能的研究[D].中国科学技术大学,2009.