DH5Α大肠杆菌菌体蛋白抗体的应用

背景^[1-3]

DH5Α大肠杆菌菌体蛋白抗体是一类可以特异性结合DH5Α大肠杆菌菌体蛋白的多克隆抗体，主要用于检测DH5Α大肠杆菌菌体蛋白的免疫组化、ELISA等实验。DH5Α大肠杆菌菌体蛋白抗体以DH5α的菌体蛋白为抗原，免疫健康家兔获得高效价免疫血清，再经蛋白A亲和柱层析纯化，溶于PBS(pH7.4)中，蛋白浓度≥1mg/ml，可与DH5α的菌体蛋白反应。DH5Α大肠杆菌菌体蛋白抗体经一抗稀释液稀释后可用于ELISA(1:10000),IHC(1:200),IP(1:50),WB(1:300)等免疫检测分析。

大肠杆菌DH5α(E.coli DH5α)是一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取，因此，作为工程菌常用于分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。大肠杆菌DH5α是一种诱变菌株，主要表现对外源DNA的免疫缺乏。是用于基因工程的菌种，相比于正常菌种缺少了一定的免疫机制。H5α菌株是一种能够摄入外源DNA的受容菌，普通的大肠杆菌细胞内有一种“免疫”机制，即当外源DNA

大肠杆菌DH5α侵入时，会产生诸如限制性内切酶类的物质，将外源的DNA剪切掉，而其自身DNA因被修饰（如甲基化）所以不被限制酶识别，不会被剪切。这样的菌是不能直接用于基因工程的，我们总不希望目的基因导入进去还来不及复制就被剪切掉。DH5α菌株是一种经诱变的菌株，其基本特性是：Rˉ、Mˉ、AMPˉ。Mˉ是指DH5α菌株缺乏DNA修饰，即其自身DNA不会被修饰。Rˉ是指其缺乏“免疫”机制，不会对导入的外源DNA切割。AMPˉ是指其对氨苄青霉素敏感。DH5α菌株可以用于制作基因库等，除此之外，因其特性，可用作基因工程的受体菌。

应用^[4][5]

生物制品质量控制中残留蛋白检测方法的建立和应用研究

采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到抗菌体蛋白兔多克隆抗体。应用饱和硫酸铵、阴离子交换柱层析和亲和层析方法纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白多克隆抗体,纯化后标记生物素,并经亲和素放大系统放大。在国内首次建立了亲和层析方法纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白多克隆抗体检测大肠杆菌菌体蛋白的ELISA方法,敏感性为0.32μg/L,检测范围在1-100μg/L,批内CV小于7.7%,批间CV小于6.2%,具有良好的稳定性,敏感性与检测范围与国际同类商品化检测试剂盒接近。

此外,本实验还采用大肠杆菌菌体蛋白免疫小鼠并制备得到抗菌体蛋白小鼠的单克隆抗体33株。经质谱分析鉴定出抗大肠杆菌菌体蛋白成分中分子伴侣GroEL的单克隆抗体,并且抗体可以用来通过免疫沉淀的方法,从大肠杆菌菌体蛋白中分离出这一分子,为进一步研究分子伴侣GroEL的结构和功能提供了新的手段。

参考文献

[1]Purification and characterization of a 28-kDa major protein from ginseng root[J].Ji Y.Yoon,Byung H.Ha,Jeung S.Woo,Yoong H.Lim,Kyung H.Kim.Comparative Biochemistry and Physiology,Part B.2002(3)

[2]Health Risk Assessment Practices in the U.S.Food and Drug Administration[J].D.W.Gaylor,J.A.Axelrad,R.P.Brown,J.A.Cavagnaro,W.H.Cyr,K.L.Hulebak,R.J.Lorentzen,M.A.Miller,L.T.Mulligan,B.A.Schwetz.Regulatory Toxicology and Pharmacology.1997(3)

[3]Preferential Binding with Escherichia coli hsp60 of Antibodies Prevalent in Sera from Patients with Rheumatoid Arthritis[J].Daisuke Hirata,Itaru Hirai,Masahiro Iwamoto,Taku Yoshio,Akira Takeda,Jun-Ichi Masuyama,Akio Mimori,Shogo Kano,Seiji Minota.Clinical Immunology and Immunopathology.1997(2)

[4]Arthus phenomenon like skin reaction and antibody pattern in rabbits immunized with various myxovirus fractions[J].O.Bonin,I.Schmidt,K.Schmidt,G.Enders-Ruckle,I.Berkes.Archiv für die gesamte Virusforschung.1971(3)

[5]张葵.生物制品质量控制中残留蛋白检测方法的建立和应用[D].第四军医大学,2008.