人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒说明书

实验原理^[1]

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 AQP-4 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 AQP-4与单抗结合，加入生物素化的抗人 AQP-4 ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，AQP-4 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中AQP-4 浓度。

试剂盒组成 （ 2-8 ℃保存）

检测程序^[1]

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3. 每孔中加入抗体工作液100ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 60 分钟。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 30 分钟。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。

8. 每孔加入100ul 终止液混匀。

9. 30分钟内用酶标仪在 450 nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2. 以标准品10 、 5 、 2.5 、 1.25 、 0.625 、 0.312 、 0.156 、 0 ng/ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 AQP-4 含量。

主要参考文献

[1] 鲁宏 孙善全；水通道蛋白-4在早期缺血性脑水肿中的表达。《解剖学杂志》2003年 第4期。