DAB显色试剂盒的应用

背景^[1-3]

DAB显色试剂盒可用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色。

DAB显色试剂盒是一种借助辣根过氧化物酶（HRP），用于免疫组化显色的试剂盒。DAB，即3,3-N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的底物。在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水、乙醇和二甲苯。因此，在DAB显色后，还可使用溶于乙醇的染料进行后续的染色。过氧化物酶使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温5-20分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。

使用方法：

1．对于组织切片或细胞样品或膜，在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2．试剂A和B等量混匀后即配制成DAB染色工作液。

3．最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品。

4．室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。

5．去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。

6．对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

应用^[4][5]

用于弥漫性轴索损伤弥散张量成像及免疫组织化学研究

弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)诊断一直是神经科学、法医病理学实践和研究的一项重、难点课题,尤其是对伤后迅速死亡的DAI案例,其早期发现、检测更缺乏客观、准确的方法。

以往的检测方法主要在亚细胞水平检测轴索损伤后形态学改变和某些生物标记物(biomarkers)表达改变,主要通过应用银染法、免疫组织化学染色方法检测轴索损伤。这些方法在诊断DAI时均存在缺陷,如银染法无法发现急性期轴索损伤,而各种免疫组织化学的生物标记物则无法区别原发性和继发性的轴索断裂,同时这些标记物严重依赖于轴索损伤后形态改变,即在轴索出现明显形态改变的时间窗时才具有诊断价值。轴索损伤后,髓鞘、轴膜、轴索内微结构甚至轴索间隙的改变均可以引起损伤局部区域水分子弥散大小、方向等弥散特征改变,而且随着损伤时间延长,水分子弥散也可能出现一定的变化规律。

参考文献

[1][1]Low expression of DAB2IP contributes to malignant development and poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J].XiaojingZhang,NingLi,XianzhengLi,WeiZhao,YudanQiao,LiLiang,YanqingDing.Journal of Gastroenterology and Hepatology.2012(6)

[2]Epothilone B Confers Radiation Dose Enhancement in DAB2IP Gene Knock-Down Radioresistant Prostate Cancer Cells[J].Zhaolu Kong,Pavithra Raghavan,Daxing Xie,Thomas Boike,Sandeep Burma,David Chen,Arup Chakraborty,Jer-Tsong Hsieh,Debabrata Saha.International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics.2010(4)

[3]Inactivation of Ras GTPase-activating proteins promotes unrestrained activity of wild-type Ras in human liver cancer[J].Diego F.Calvisi,Sara Ladu,Elizabeth A.Conner,Daekwan Seo,Jer-Tsong Hsieh,Valentina M.Factor,Snorri S.Thorgeirsson.Journal of Hepatology.2010(2)

[4]Decreased Expression of the RAS-GTPase Activating Protein RASAL1 Is Associated With Colorectal Tumor Progression[J].Miki Ohta,Motoko Seto,Hideaki Ijichi,Koji Miyabayashi,Yotaro Kudo,Dai Mohri,Yoshinari Asaoka,Motohisa Tada,Yasuo Tanaka,Tsuneo Ikenoue,Fumihiko Kanai,Takao Kawabe,Masao Omata.Gastroenterology.2009(1)

[5]李上勋.弥漫性轴索损伤弥散张量成像及免疫组织化学研究[D].华中科技大学,2012.