硫酸核糖霉素的制备

背景及概述^[1]

硫酸核糖霉素是采用国产链霉素3719经过诱变筛选所得菌种的发酵液，经提炼而得的一种氨基糖苷类抗生素。

硫酸核糖霉素是一种氨基糖苷类抗生素，抗菌谱广，对各种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌均显示有较强的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌等敏感细菌感染的疾患，如败血症、支气管炎、肺化脓症、脓胸、胆道感染、腹膜炎以及泌尿系统感染等均有疗效，与青霉素G、四环素、氨苄青霉素或邻氯青霉素间无交叉耐药，与卡拉霉素有交叉耐药，吸收良好，血浓度高，毒性低于其他氨基糖苷类抗生素。

制备^[1]

一种高纯度硫酸核糖霉素的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：将硫酸核糖霉素解析液调节至呈酸性，并进行稀释；

步骤二：将硫酸核糖霉素解析液压到充满树脂的离交柱内，再用去离子水洗涤，吸附，取样测旋光；

步骤三：用氨水继续进行洗涤，取样测旋光至旋光为“0”，停止洗涤；

步骤四：将硫酸核糖霉素解析液进行浓缩；

步骤五：将硫酸核糖霉素浓缩液成盐炭脱，得到硫酸核糖霉素脱色液，最后经喷雾干燥制得成品。

其中，步骤一中，采用硫酸将硫酸核糖霉素解析液pH值控制在5.0，用纯化水将硫酸核糖霉素解析液稀释至18μ/ml。硫酸浓度为10％，并在15℃下调节硫酸核糖霉素解析液pH值。

步骤二中，将硫酸核糖霉素解析液以180L/h的流速压到充满树脂的离交柱内，再用去离子水以180L/h的流速洗涤7小时，吸附3小时，每1小时取样测旋光。

步骤三中，用0.1mol/L的氨水以190L/h的流速洗涤70h，再将氨水流速调至90L/h进行洗涤，取样测旋光，当旋光＜0.4后，加1.5mol/L的氨水继续洗涤并控制流速为280L/h，洗涤至旋光为“0”。

步骤四中，将硫酸核糖霉素解析液通过纳滤膜浓缩，并将温度控制在40℃以下。

步骤四中，再经过蒸汽薄膜器进行二次浓缩，并控制真空度≤-0.08Mpa、温度≤65℃、流量400L/h。

制剂^[2]

一种注射用硫酸核糖霉素冻干粉针剂，包括：

硫酸核糖霉素 1000g；

用2000mL注射用水将硫酸核糖霉素溶解至500g/L；

其制备方法包括如下步骤：

(1)制备硫酸核糖霉素半成品：准确称取处方量的硫酸核糖霉素，将其加入至处方量的注射用水中，搅拌溶解至溶液澄清；再计入活性炭进行搅拌吸附，时间为30分钟，活性炭的用量为0.1％g/mL；除去活性炭，经0.45μm和0.22μm的微孔滤膜过滤，所得到的滤液即为硫酸核糖霉素半成品。

(2)将硫酸核糖霉素半成品进行冷冻干燥，所述冷冻干燥包括以下三阶段：

预冻阶段：先将冻干机板层温度降至0℃，将硫酸核糖霉素半成品放入冻干机中，保持30分钟，再经1小时降至-40℃，保持2小时；

升华干燥阶段：板层温度以4℃/小时的升温速率至-5℃～0℃，并保持3小时；

解析干燥阶段：板层温度以8℃/小时的升温速率至35℃，并保持3小时，即得硫酸核糖霉素冻干粉针剂。

质量评价^[3]

史孙亮等人建立了高效液相色谱-脉冲安培检测法（HPLC-PAD）测定硫酸核糖霉素的含量和有关物质。方法：采用Thermo AcclaimTMAmG C18（4. 6 mm×150 mm,3μm）色谱柱，以0. 2%（V/V）五氟丙酸溶液[含0. 15%（V/V）三氟乙酸，用50%（m/m）氢氧化钠溶液调节pH值至1. 5]-乙腈（99∶1）为流动相,脉冲安培检测器,四电位检测波形，检测器温度35℃，进样体积为25μL。结果：所建方法使核糖霉素及其有关物质良好分离，核糖霉素的检出限为0. 15μg·m L-1（3. 75 ng），定量限为0. 375μg·m L-1（9. 38 ng），在0. 15～40μg·m L-1内，核糖霉素的浓度与峰面积呈良好的线性关系（r=0. 9993），含量测定重复性RSD（n=6）为0. 33%，总杂质测定重复性RSD（n=6）为1. 10%。结论：该方法专属性强,灵敏度高,稳定好,检验成本较现行Ch. P 2015方法显著降低,有望实现方法替代。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201911325732.7 一种高纯度硫酸核糖霉素的制备方法

[2] [中国发明] CN201610550776.X 一种注射用硫酸核糖霉素冻干粉针剂及其制备方法

[3]史孙亮,侯玉荣,耿悦,张玫,袁耀佐,杭太俊.高效液相色谱-脉冲安培检测法测定硫酸核糖霉素含量及有关物质[J].中国药学杂志,2019,54(04):321-326.