人周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人周期素依赖性激酶4(CDK-4)水平。用纯化的人周期素依赖性激酶4(CDK-4)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入周期素依赖性激酶4(CDK-4)，再与HRP标记的周期素依赖性激酶4(CDK-4)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的周期素依赖性激酶4(CDK-4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人周期素依赖性激酶4(CDK-4)浓度。

周期素依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases，CDKs）是一个蛋白质激酶家族，因其在细胞周期中的调控作用而首次被发现，该蛋白家族也涉及转录调控、mRNA加工和神经细胞的分化。细胞周期失控是癌症的一个标志性特征，细胞周期素依赖性激酶（CDK)4和6是细胞周期的关键调节因子，CDK4/6在许多细胞中均过度活跃，导致细胞增殖失控。在雌激素受体阳性乳腺癌中，CDK4/6的过度活跃也非常频繁。

这类酶存在于已知所有真核生物中，其在细胞周期中的调控作用在进化中相当保守。事实上，酵母细胞的CDK基因被人类的同源基因替换后仍可以正常生长分裂。CDK还是相对较小的蛋白，其分子量在34到40千道尔顿之间，包含有多个激酶结构域。

应用^[4][5]

用于细胞周期依赖性激酶4在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用研究

细胞周期依赖性激酶4(Cdk4)是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的成员,它与周期蛋白D(Cyclin D)结合形成复合物,推进细胞周期G1期的进程。大量研究表明Cdk4在肿瘤发生中起着重要作用。Cdk4是否在恶性肿瘤转移中也起一定作用,以及其作用机制尚未明确。针对这一问题,本课题以乳腺癌细胞系为模型,探究Cdk4在肿瘤转移中的作用。通过Cdk4 RNA抑制和质粒介导的Cdk4过表达的方法,我分别构建了Cdk4抑制和过表达的EMT6和MDA-MB-231乳腺癌细胞系。通过划痕实验和Transwell实验,我发现,抑制Cdk4的表达后,乳腺癌细胞的侵袭转移能力明显降低;而过表达Cdk4后,乳腺癌细胞的侵袭转移能力则明显增强。

同时,采用了体内实验的策略对上述发现进行了进一步的证明,同种移植模型和异种移植模型都显示,Cdk4抑制后,小鼠肺转移的现象出现地较晚,并且转移灶数量减少。这些结果表明:Cdk4促进乳腺癌细胞的侵袭转移。为了进一步探索Cdk4在乳腺癌细胞侵袭转移过程中的作用机制,我运用基因芯片技术和Real-time PCR技术检测了Cdk4抑制和过表达前后一系列与细胞侵袭转移相关因子表达的变化。结果显示,Cdk4促进这些因子的表达。这就提示我们,Cdk4通过调控与肿瘤侵袭转移相关因子来促进乳腺癌细胞的侵袭转移。本实验通过调控Cdk4在乳腺癌细胞系中的表达,揭示了Cdk4在肿瘤侵袭转移中的重要作用,并进一步探索Cdk4在乳腺癌细胞侵袭转移过程中的作用机制,为建立在Cdk4基础上的乳腺癌治疗提供了新的理论基础和依据。

参考文献

[1]Gene Hypermethylation in Multiple Myeloma:Lessons from a Cancer Pathway Approach[J].Chor S.Chim,Yok L.Kwong,Raymond Liang.Clinical Lymphoma&Myeloma.2008(6)

[2]The Impact of Transgenic IGF-IR Overexpression on Mammary Development and Tumorigenesis[J].Robert A.Jones,Roger A.Moorehead.Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia.2008(4)

[3]Switching cyclin D-Cdk4 kinase activity on and off[J].Stacy Blain.Cell Cycle.2008(7)

[4]Gene profile analysis of colorectal cancer cell lines by cDNA macroarray[J].Noboru Saito,Shingo Kameoka,Ryuji Furukawa.Oncology Reports.2007(5)

[5]谢晋鹤.细胞周期依赖性激酶4在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用[D].首都师范大学,2009.