AN2728的制备与作用机制

背景及概述^[1]

克立硼罗（AN2728）最早由AnacorPharmaceuticals公司研发，于2016年5月辉瑞收购了Anacor公司，同年12月，美国FDA批准克立硼罗（AN2728）软膏（2%或5%）上市，用于局部治疗2岁以上患者轻度至中度特异性皮炎，商品名为Eucrisa。

作用机制^[1]

当皮肤屏障失效时，会触发角质层细胞的先天免疫系统，产生细胞因子，引起一系列的免疫反应和慢性炎症症状。在特应性皮炎中Th22细胞因子（白细胞介素-22），Th2细胞因子（白细胞介素-4，白细胞介素-5和白细胞介素-13）和Th17过度表达。克立硼罗（AN2728）是一种有效的选择性磷酸二酯酶-4（PED-4）抑制剂，通过抑制磷酸二酯酶-4活性发挥作用。磷酸二酯酶-4是参与控制炎症细胞活性的主要cAMP代谢酶。它在树突细胞，T细胞，巨噬细胞和单核细胞等免疫细胞中高度表达。克立硼罗（AN2728）通过抑制PED-4水解cAMP使其浓度增加，进而抑制促炎介质（TNFα，IL-6，IL-12）的产生。基于PDE-4在各种炎症细胞中的存在和作用，PDE-4抑制剂几乎可以在所有炎症细胞中发挥抗炎作用。

适应症^[1]

用于治疗儿童及成人轻度至中度特应性皮炎。

制备^[2]

一种克立硼罗（AN2728）的制备方法，包括如下步骤：

S1、2-氰基-4-硝基苯硼酸的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中加入浓硫酸1.67kg，冰盐浴下缓慢滴加发烟硝酸1.07kg，控制反应体系的温度不超过20℃，加完后分批加入2-氰基苯硼酸500g，加完后升温至80℃反应5h，TLC监控反应的进程，原料转化完全后冷却至室温，将得到的反应液倒入5L的冰水中，有大量浅黄色固体析出，经过滤，干燥、无水乙醇重结晶得到浅黄色2-氰基-4-硝基苯硼酸；

S2、2-甲酰基-4-硝基苯硼酸的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中加入2-氰基-4-硝基苯硼酸0.5kg，冰盐浴降低反应体系的温度至0℃，缓慢滴加2mol/L的二异丁基氢化铝甲苯溶液1.56kg，控制反应体系的温度不超过10℃，滴加完毕后在0℃继续反应2h，HPLC监控反应的进程，原料转化完全后，将得到的反应液倒入5％的稀盐酸中，经乙酸乙酯萃取，干燥、浓缩得到2-甲酰基-4-硝基苯硼酸；

S3、2-羟甲基-4-硝基苯硼酸的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中依次加入2-羟甲基-4-硝基苯硼酸400g，甲醇2000mL，降低反应体系的温度至0℃，缓慢分批次向反应体系中加入硼氢化钠233g，控制反应体的温度不超过20℃，加料完毕后升温至室温继续反应2h，HPLC监控反应的进程，原料转化完全后，0℃下向反应体系中加入5％的稀盐酸淬灭，经乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥、浓缩得2-羟甲基-4-硝基苯硼酸粗品，乙醇重结晶得到类浅黄色固体2-羟甲基-4-硝基苯硼酸；

S4、2-羟基甲基-5硝基苯硼酸半酯的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中依次加入2-羟甲基-4-硝基苯硼酸392g，四氢呋喃1920mL，5mol/L的稀盐酸40mL，30℃下搅拌反应5h，HPLC监控反应的进程，原料转化完全后，用5％的氢氧化钠调节pH至6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥、浓缩得2-羟基甲基-5硝基苯硼酸半酯粗品，经乙醇重结晶得到2-羟基甲基-5硝基苯硼酸半酯；

S5、2-羟基甲基-5-羟基苯硼酸半酯的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中加入2-羟基甲基-5硝基苯硼酸半酯277g，甲醇1350mL，5％的钯炭5.4g(Pd：C为0.02：1)，通入氢气，室温反应5h，HPLC监控反应的进程，原料转换完毕后，过滤除去钯炭，将产品直接浓缩干，加入36.5％的浓盐酸170g，冰盐浴下缓慢滴加117g亚硝酸钠配成的500mL水溶液，滴加完毕后室升温至室温反应2h，将得到的反应液滴加到100mL50％的浓硫酸中，120℃反应2h，HPLC监控反应的进程，水解完全后，用饱和碳酸氢钠调节pH至6，经乙酸乙酯萃取，干燥、浓缩得2-羟基甲基-5-羟基苯硼酸半酯；

S6、克立硼罗（AN2728）的合成：在装有机械搅拌的圆底烧瓶中加入对氟苯甲腈161g，2-羟基甲基-5-羟基苯硼酸半酯200g，碳酸钾221g，N，N-二甲基甲酰胺2000mL，升温至110℃反应12h，HPLC监控反应的进程，原料转化完全后，过滤除去固体，将滤液倒入冰水中淬灭，经乙酸乙酯萃取、无水硫酸钠干燥、浓缩得克立硼罗（AN2728）粗品，再经正己烷打浆，过滤、干燥得克立硼罗（AN2728）。

主要参考资料

[1] 高洋. 克立硼罗合成工艺及质量标准研究[D].吉林大学,2019.

[2] CN201811270792.9一种克立硼罗（AN2728）的制备方法