寡核苷酸纯化试剂盒

概述^[1]

本试剂盒采用硅基质膜技术，通过快速方便的结合-洗涤-洗脱三步骤从多种酶促反应液中纯化回收核苷酸链和DNA片段。适合于从去磷酸化、限制性内切酶酶切、连接、末端标记等反应产物中回收17-40mers的寡核苷酸片段。纯化过程可去除10bp以下的寡核苷酸、盐及其他杂质。回收纯化的寡核苷酸片段纯度高，完整性好，浓度高，方便后续操作。纯化后DNA可用于芯片分析、放射性和荧光测序、连接和转化、限制性酶酶切、标记、显微注射、PCR、体外转录。

实验前准备 ^[1]

1.本实验需要无水乙醇,离心管请自备。

2.本试剂盒可无选择性的回收溶液中所有DNA片段段（可去除小于10bp的小片段），回收的最小片段可达17bp,如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。

3.使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

4．次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer3#中加入无水乙醇。

5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

6.所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤^[1]

1.估计DNA反应液的体积，如果回收片段<100bp，加入10倍体积的Buffer1#（如PCR反应体系为50µl，则加入500µlBuffer1#）；如果回收片段≥100bp，则只需要加入5倍体积的Buffer1#（如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBuffer1#）。

2.柱平衡：向已吸附柱中(吸附柱应预先装入收集管中)加入200μlBuffer2#，12,000rpm（~13,400×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

3.将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min。

注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl可分批加入。

4.离心后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：对于含有放射性的样品，离心后，将装有废液的收集管弃掉，将吸附柱放入一新的收集管中。

5.向吸附柱中加入600µlBuffer3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：对于含放射性的样品，向吸附柱中加入450µlBuffer3#（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1min。将废液弃掉，将吸附柱重新放回收集管中，重复操作一次。

6.12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

7.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加100-200µlBuffer4#，室温放置2min，12,000rpm离心1min收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意事项

1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤7。

3）洗脱体积不应小于100μl，体积过少会影响回收效率。

4）如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

5）回收大于10kb的DNA片段时，Buffer4#应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

主要参考资料

[1]寡核苷酸纯化试剂盒产品说明书