植物RNA提取试剂

概述^[1]

本试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中(如马铃薯块茎，白松松针或嫩苗，和西红柿叶等)提取高纯度的总RNA。每100 ml可处理100 mg组织200次。自备试剂：液氮，研钵，无RNase离心管，5 M NaCl(无RNase水配制)，氯仿，异丙醇，75%乙醇(无RNase水配制)，无RNase水。

少量提取操作步骤^[1]

1.取不多于0.1g植物组织，在液氮中研碎，转移到1.5 ml 离心管中，加0.5 ml提取试剂，振荡至彻底混匀。

注：振荡不要太剧烈，否则容易导致基因组DNA污染。

2.室温放置5分钟。

3.4℃条件下12000 rpm离心2-3分钟，上清转入新的无RNase离心管。

4.上清中加入0.1 ml5 M NaCl(无RNase水配制)，温和混匀。

5.加入0.3 ml 氯仿，上下颠倒混匀。

6.4℃条件下12000 rpm离心10-15分钟，取上层水相转入新的无RNase离心管。

7.加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

8.4℃条件下12000 rpm离心10-15分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1 ml 75%乙醇冲洗沉淀。(沉淀可能很难看见，应小心操作。)

9.4℃条件下5000-7000rpm离心3分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体短暂离心，用枪头吸出，室温晾干1-2分钟至沉淀干燥。

10.加适量无RNase水充分溶解RNA，-70℃保存。

注意：本试剂有刺激性味道，操作时请在通风处进行。

主要参考资料

[1] 植物RNA提取试剂产品说明书