细菌基因组DNA快速提取试剂盒

概述^[1]

试剂盒是一种将测定一种成分所需要的2种或2种以上的试剂及实验室一般用品连同操作说明书包装在一起，形成商品化的试剂单位，即由厂家提供给用户使用的一种套装试剂，使用者除用自备的蒸馏水或试剂盒提供的缓冲液进行复溶试剂的操作外不需要作任何试剂配制。目前检测试剂已广泛采用这一方式提供，kit的应用不但节约人力减少配制误差，而且有利于试剂质量的保证和实验室间方法学的统一，提高了可比性。

细菌基因组DNA快速提取试剂盒用于细菌基因组DNA的小量提取。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从0.5-2ml对数生长期的菌液（不超过10⁶–10⁸个）中提取到3-20μg超纯基因组DNA（OD260/280=1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于酶切、PCR等后续实验。

产品特点^[2]

高效：细菌基因组DNA快速提取试剂盒一次可获得3-20μg基因组DNA。

快速：30min内即可获得超纯的基因组DNA。

安全：整个操作中不用酚/氯仿有机物。

高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。

产品用途^[2]

常规限制性酶切；PCR扩增；Southern杂交；分子标记分析。细菌基因组DNA快速提取试剂盒纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

注意事项^[2]

1应尽量使用新鲜的菌体，确保提取的基因组DNA不被降解。

2在操作步骤4中，菌体应充分悬浮，不要残留菌块，避免影响溶菌效果。

3在操作步骤5种，加入无水乙醇后，可能会出现絮状沉淀，应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，确保基因组DNA的得率。

4基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。

5基因组DNA浓度及纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。

基因组DNA的浓度及纯度检测^[2]

1基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2 DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。

3 OD260/280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

[2] 细菌基因组DNA快速提取试剂盒