酵母基因组DNA快速提取试剂盒

概述^[1]

本试剂盒采用DNA吸附柱和独特的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份^[1]

缓冲液YB————————————20ml

结合液CB————————————11ml

漂洗液WB————————————15ml

抑制物去除液IR—————————25ml

洗脱缓冲液EB——————————15ml

Lyticase(10U/μl)———————2500U

蛋白酶K冻干粉(20mg/ml)—————20mg

吸附柱AC————————————50个

收集管(2ml)——————————50个

产品特点^[1]

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项^[1]

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2. 需要自备乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇。

3. 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。

4. 结合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 用户需要自备Sorbitol buffer(1M 山梨醇，0.1M Na₂EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。

配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5M Na₂EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH 值，定容到1L，4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。

6. 菌体浓度检测一般OD600 值为1 的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD 值变化也很大，以上仅供参考。

7. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH 大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

主要参考资料

[1] 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)产品说明书