粪便基因组DNA快速提取试剂盒

概述^[1][2]

本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA，包括细胞、细菌、寄生虫以及病毒DNA，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg的粪便样本，纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段，纯化过程中不需苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成^[1]

实验前准备及重要注意事项^[2]

1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。

2、次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。

3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

4、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本试剂盒并未提供。

注意：

1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。

2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。

5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。

储存条件：室温(15～30℃)。

主要参考资料

[1] 粪便基因组DNA提取试剂盒产品说明书