阿力甜的测定

发布日期:2020/4/13 13:09:44

背景及概述^[1]

阿力甜是一种以天冬氨酸和丙氨酸为原料合成的二肽类人工合成甜味剂，其甜度为蔗糖的2000倍以上，比阿斯巴甜高10倍，具有口感好、甜度高和热量低的优点，是蔗糖的替代品之一，性质稳定，广泛应用于食品行业，可添加于乳制品，冷冻饮品，蜜饯，饮料，胶基糖果，果冻等食品中GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对以上食品的使用限量均做出明确的规定。

阿力甜作为强甜味剂，一般被认为是无毒和刺激性的物质，WHO 规定阿力糖日允许摄入量可达 0.1 mg/kg。目前，阿力甜尚未被 FDA 认可，全世界只有中国、澳大利亚和墨西哥等6个国家批准使用，我国卫生部于1994年就已批准使用。1996年JECFA 确定的 ADI 值为 1mg/kg。

含量测定^[1]

1 仪器与试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪（检测器；DAD，型号：1260 厂家：美国 Agilent），电子天平（精确度：0.01mg 型号：BT125D，厂家：赛多利斯仪器有限公司），超声波清洗器（型号：S180H，厂家：德国 ELMA）。漩涡混合器（型号：TYXH-II，厂家：TYXH-II），组织捣碎机（型号：JJ-2B，厂家：金坛市城东新瑞仪器厂）。

1.2 试剂

阿力甜标准品（来源：stanford Chemicals，批号：A161115-09；纯度：98.09%），甲醇（色谱级，美国FISHER），实验用水均为 GB/T 6682-2008 规定的一级水。

2 实验方法

2.1 标准溶液的制备

（1）标准储备液的制备：精密称取 2.41 mg 阿力甜标准品，加水溶解并稀释至 5.00 mL。浓度：0.472 8 mg/mL。

（2）标准工作曲线的制备：取上述溶液各0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.5 mL，1.0 mL分别置于10 mL量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，即为标准使用液。

2.2 样品前处理与测定

蜜饯首先需要去掉果核。用食品加工机按试样与水的质量比为 1∶4 进行匀浆，称取约 5 g（精确到0.001 g）匀浆试样于25 mL 的离心管中，加入 10 mL 70%的甲醇水溶液，摇匀，超声 10 min，4 000 r/min离心5 min，上清液转入25 mL容量瓶，再加8 mL 50%的甲醇水溶液重复操作一次，上清液转同一个 25 mL 容量瓶，最后用 50%的甲醇水溶液定容，经0.45 μm有机系滤膜过滤后用于色谱分析。

3 色谱条件

色谱柱：Waters SunFire C18 250 mm×6.4 mm，5 μm，检测波长：200 nm 柱温：40 ℃，流速：1 mL/min，进样量：10 μL，流动相：V甲醇∶V水＝（40∶60）。

4 数学模型的建立

试样中阿斯巴甜或阿力甜含量的计算：

式中：X——试样中阿斯巴甜或阿力甜的含量，g/kg；

ρ——由标准曲线计算出进样液中阿斯巴甜或阿力甜的浓度，μg/mL；

V——试样的最后定容体积，mL；

m——试样质量，g；

1 000——由μg/g换算成g/kg的换算因子。

标准物质制备^[2]

一种阿力甜标准物质制备方法，包括以下各步骤：

(1)阿力甜溶液的制备：制备阿力甜标准物质的原料为工业级阿力甜，将阿力甜原料溶于水并采用超声溶解，然后经0.22μm滤膜过滤，得阿力甜溶液；

(2)液相色谱制备：将阿力甜溶液注入制备色谱分离纯馏分，其色谱条件为色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)；流动相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min；柱温：30℃；运行时间：15min；检测波长：210nm，进样量0.2mL，收集7.5-9min之内的馏分；

(3)馏分收集：馏分接收于预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中,然后加入少量盐酸中和至pH7；

(4)干燥：馏分置于旋转蒸发仪采用减压蒸馏的方法于55℃-75℃下，然后置于冻干机-50℃中冻干24小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干24小时已尽量去除游离水，得阿力甜标准物质；经测定，该标准物质纯度为99.4％。

(5)保存：在相对独立和洁净手套箱内对制备的纯阿力甜固体采用2mL棕色样品瓶进行分装，用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖加封，并采用塑料袋独立真空塑封。