苯胺蓝(水溶)的应用

概述^[1]

苯胺蓝(水溶)(AinlinblueW.5.,AnB)曾用作酸碱指示剂,在生物学和医学中用作神经组织、细胞质等的染色剂川,未见用作分析试剂的报道。试验发现,在pH2.1的Brit-otoRoibnson缓冲介质存在的苯胺蓝(水溶)溶液中加人BSA,溶液发生减色效应。可以作为蛋白质的吸光探针。在反应条件下,苯胺蓝(水溶)溶液的吸收峰在600nm,苯胺蓝(水溶)与BSA相互作用形成复合物后,溶液发生减色,其吸收峰仍在600nm波长处,以试剂空白为参比时,在600nm波长处形成一波谷,在678nm波长处形成一波峰,波峰和波谷的吸光度绝对值均与BSA的浓度呈良好的线性关系,可用于蛋白质的定量测定。

应用^[3]

苯胺蓝(水溶)荧光染色法观察匍匐翦股颖叶片组织

S1、进行药品的配制；

S11、将福尔马林10ml、乙酸3ml、50％的乙醇87ml、5ml甘油混合均匀，得FAA固定液；

S12、将无水乙醇与二甲苯以1：1的比例混合配制成1/2二甲苯；

S13、称取0.1g苯胺蓝(水溶)溶解于100ml浓度为0.07mol/L，pH＝7的磷酸缓冲液中，得0.1％的苯胺蓝(水溶)荧光染色剂。

S2、制作石蜡切片；

S21、用锋利的刀片快速取下宽度约0.8mm的匍匐剪股颖叶片，将叶片切割成长度约5mm左右小段，放入青霉素小瓶中，加入步骤S11所得的FAA固定液，固定12h；

S22、经FAA固定后，依次置换15％、30％、50％、70％、85％乙醇中进行梯度脱水，各脱水20min，于95％乙醇中脱水30mim，无水乙醇中脱水两次，各20min；然后依次置换1/2二甲苯、二甲苯进行透明，于1/2二甲苯中透明1h，二甲苯中透明两次，每次30min，至材料完全透明为止；

S23、在装有所得透明材料的青霉素小瓶中加碎蜡两次，次加入与瓶中二甲苯等量的碎蜡，放入电热鼓风干燥箱中温度36℃保持1h至所加碎蜡完全融化后，加入瓶中液体一半的碎蜡，放入电热鼓风干燥箱中调节温度至36℃过夜后，调节温度至42℃，置换50％石蜡保持1h后，温度调至50℃，置换75％的石蜡保持30min后，调节温度至60℃，依次置换纯石蜡A、纯石蜡B、纯石蜡C各30min，然后采用TKY-BMB型石蜡包埋机进行包埋，一个蜡块中一个材料，蜡块的尺寸为：0.5cm×0.5cm×0.5cm，将包埋好的蜡块冷却后直接修块，进行切片或保存到4℃冰箱备用；

S24、采用轮式手动切片机进行连续切片，厚度10μm；将HH-6数显恒温水浴锅温度调节至45℃，在500ml大烧杯加入蒸馏水放入水浴锅中，将切好的蜡带放入烧杯中，待蜡带完全展开后，将涂抹好蛋清甘油的载玻片伸入烧杯中，使蜡带粘到载玻片上，将粘有蜡带的载玻片自然晾干后，在光学显微镜下观察展片效果，取展片效果好的片子置于电热鼓风干燥箱中于38℃下烘烤，直到片子完全干燥；

S25、取干燥的片子，依次放到分别加有二甲苯、1/2二甲苯、95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇、磷酸缓冲液、0.1％的苯胺蓝染色剂的立式染缸中；在二甲苯、1/2二甲苯中各5min，95％的乙醇、85％的乙醇、70％的乙醇、50％的乙醇、30％的乙醇中各5S，磷酸缓冲液中10min，0.1％的苯胺蓝(水溶)染色剂中30min；然后将染色后的片子取出，置于蒸馏水中30S，洗净片子上的杂质后，过1/2二甲苯、二甲苯各10S，待片子干燥后采用中性树胶封片；

S26、将所得的片子自然风干后，置于LeiCaDM6000B荧光显微镜下观察并拍照。

主要参考资料

[1] 黎雪莲, 袁若, 柴雅琴, 张凌燕, 王娜, & 朱强. (2006). 基于静电吸附甲苯胺蓝和纳米金固定过氧化物酶生物传感器的研究. 分析化学, 34(3), 389-392.

[2] 肖锡林, 王永生, 李贵荣, & 吕昌银. (2004). 甲苯胺蓝共振光散射法测定纳克级脱氧核糖核酸. 光谱学与光谱分析, 24(2), 190-193.

[3] 赵香汝, 王家鑫, & 崔平. (2000). 肥大细胞用甲苯胺蓝染色之体会. 中国组织化学与细胞化学杂志, 9(3), 359-359.