3-磷酸甘油醛脱氢酶(兔来源免疫组化用抗体)的应用

背景^[1-3]

3-磷酸甘油醛脱氢酶(兔来源免疫组化用抗体)是以兔为宿主制备的3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体蛋白。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解（glycolysis）过程中的关键酶。

除了在胞质中作为糖酵解的酶以外，有证据表明哺乳动物细胞中的GAPDH参与了多种胞内生化过程，包括膜融合（membrane fusion）、微管成束（microtubule bundling）、磷酸转移酶（phosphotransferase）激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复。一些生理因素，诸如低氧（hypoxia）和尿糖（diabetes），可以增加GAPDH在特定细胞中的表达。GAPDH存在于几乎所有的组织中，以高水平持续表达。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30－40kDa的亚基组GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,是很好的内参抗体。GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。在实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确；或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差需要通过测定每个样品中实际转到膜上的GAPDH的含量来进行校正，所以一般的western实验都需要进行内参设置。具体校正的方法就是将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量。然后才进行样品与样品之间的比较。

应用^[4][5]

用于甘油醛3-磷酸脱氢酶的高效制备及其在原核、真核生物中的应用研究

甘油醛3-磷酸脱氢酶(glyceraldehydes3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)是糖酵解反应的关键酶，为生物体的各种生命活动提供能量。该酶基因为看家基因，一般情况下在组织和细胞中高水平表达，可被用作RT-PCR、Westernt Blot等试验的内参。近年来甘油醛3-磷酸脱氢酶的新功能也越来越受到人们的关注，如：激活自身转录、启动细胞凋亡、调控糖酵解和戊糖磷酸途径间的转化等。本研究采用大肠杆菌原核表达系统来制备甘油醛3-磷酸脱氢酶，分别构建了pET28b-GAPDH、TAT-pET28b-GAPDH重组载体，比较了蛋白转导肽TAT标签的加入对甘油醛3-磷酸脱氢酶表达的影响。结果显示，通过蛋白转导肽TAT标签的加入，促进了甘油醛3-磷酸脱氢酶的表达，且所表达的蛋白在体外具有重要酶活。

本研究还分别对原核生物（大肠杆菌的不同菌株HB101、OP50、BL21、DH5α），真核生物（酵母、秀丽线虫、大鼠、小鼠）正常培养条件和不同处理条件（诱导剂不同浓度和处理时间、百草枯和亚硫酸盐不同浓度和时间处理）下内源性甘油醛3-磷酸脱氢进行了鉴定，此外本研究还通过原核表达技术比较了内源性和外源性甘油醛3-磷酸脱氢酶的表达量。结果表明，不论内源性和外源性甘油醛3-磷酸脱氢酶，其表达均保持相对稳定，基本不受影响，因此在原核和真核生物中甘油醛3-磷酸脱氢酶可作为通用的内标蛋白。

参考文献

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[2]Identification of suitable reference genes for measurement of gene expression in human cervical tissues[J].Yuanming Shen,Yang Li,Feng Ye,Fenfen Wang,Weiguo Lu,Xing Xie.Analytical Biochemistry.2010(2)

[3]A novel method for promoting heterologous protein expression in Escherichia coli by fusion with the HIV-1 TAT core domain[J].Yonghong Wu,Changhong Ren,Yan Gao,Bing Hou,Tingfang Chen,Chenggang Zhang.Amino Acids.2010(3)

[4]Effect of naloxone on the induction of immediately early genes following oxygen-and glucose-deprivation in PC12 cells[J].Hsueh-Meei Huang,Jean-Yuan Yu,Hsio-Chung Ou,Kee Ching Jeng.Neuroscience Letters.2008(2)

[5]张晓.甘油醛3-磷酸脱氢酶的高效制备及其在原核、真核生物中的应用[D].西北农林科技大学,2012.