粘菌素甲烷磺酸钠的制备与检测

背景及概述^[1]

粘菌素系由多粘芽胞杆菌(bacilluspolymyxa)产生的一组多肽类抗生素。其中多粘菌素B和E对革兰氏阴性菌具有显著的抗菌活性，是治疗绿脓杆菌感染的首选药物。粘菌素常用盐为硫酸盐。但硫酸粘菌素毒性大，因此在许多国家(如美国)规定其仅适用于局部外用药或口服治疗肠道感染，而对于其他非肠道给药是严格禁止使用的。为了克服硫酸粘菌素毒性大的缺陷，医药研究人员将其化学修饰后制成粘菌素甲烷磺酸钠，由此使该药物的LD50降低了50倍。粘菌素甲烷磺酸钠可用于肌注或皮注，也可通过静脉给药。目前制备粘菌素甲烷磺酸钠的方法，通常为将粘菌素与甲醛在碱性缓冲溶液中进行反应，然后再与亚硫酸氢钠反应，从而得到粘菌素甲烷磺酸钠(二步反应法)。该方法存在的缺点是产品残留有甲醛和粘菌素，且产品质量极不稳定，由此也大大增加了产品潜在的毒性。

制备^[1]

粘菌素甲烷磺酸钠的制备方法，包括以下步骤：

(a)将硫酸粘菌素水溶液用氨水或氢氧化钠溶液调节pH至9‑13，搅拌、反应1‑3小时抽滤，所得滤饼加入去离子水，配制成粘菌素混悬液；

(b)将上述混悬液中加入羟甲基磺酸钠，10～90℃温度条件下，反应1～24小时；

(c)将b步生成的反应溶液，经过凝胶型苯乙烯系强酸性阳离子交换树脂和大孔型丙烯酸系弱碱性阴离子交换树脂构成的混合树脂分离纯化；所述的混合树脂的用量按照硫酸粘菌素与混合树脂重量比为1∶1.5～3.0计；

(d)将c步所得到的产品，进行干燥。

检测^[2]

一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，所述的方法为一种基于液相色谱仪检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法包括以下步骤：

a、制备供试品溶液：精密称定粘菌素甲烷磺酸钠1.0g置烧杯中，加10mL无水乙醇，超声10min后离心分离，精密量取5mL上清液置10mL容量瓶中，并向容量瓶中精密加入3mL磷酸水溶液，1mL2，4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40℃放置5-10h；

b、制备对照品溶液A：精密称定1.1g甲醛溶液置100mL量瓶中，用无水乙醇溶解定容至刻度，所述的甲醛溶液使用前进行滴定；

c、制备对照品溶液B：精密量取1.0mL步骤b制备的对照品溶液A，置200mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度；

d、制备对照品溶液C：精密量取5.0mL步骤c制备的对照品溶液B，置50mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度；

e、制备对照品溶液：精密量取5.0mL步骤d制备的对照品溶液C，置10mL量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液，1mL2，4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40℃放置5-10h；

f、制备空白溶液：精密量取5mL无水乙醇，置10mL量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液，1mL2，4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40℃放置5-10h；

g、色谱条件：采用AgilentC184.6*250mm5.0um色谱柱，以磷酸溶液：乙腈体积比为50：50为流动相，色谱柱的柱温控制在25-35℃，流速为1.0～1.5mL/min，检测波长为336nm，进样量20μL；

h、系统适应性试验：打开液相色谱仪，预热5min，将对照品溶液连续进样3针，要求甲醛峰峰面积的RSD≤2.0％；

i、测定：分别精密量取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液各20μL，注入液相色谱仪，按步骤g的色谱条件进行测定，记录色谱图；

j、按外标法计算出粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛的残留量。

主要参考资料

[1] CN201110007006.8一种粘菌素甲烷磺酸钠的制备方法

[2] CN201410841426.X一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法