2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗体的应用

背景^[1-3]

2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗体是可以特异性结合2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的一种单克隆免疫球蛋白。2'-5'-寡腺苷酸合成酶2是以ATP为底物，在双链RNA的激活下合成以2′，5′-磷酸二酯键连接寡腺苷酸(2~5 A)的酶。寡腺苷酸可以与核糖核酸酶L结合使之被激活，降解RNA，从而抑制蛋白质的合成。该酶在干扰素诱导下形成，因而是干扰素抗病毒和抗肿瘤过程中的一个关键酶。

图：抗2'，5'-寡腺苷酸合成酶2的单克隆抗体

在分子生物学中，2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通过降解病毒和宿主RNA来抵消病毒攻击。该酶在2'-特异性核苷酸转移反应中使用ATP来合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潜伏的核糖核酸酶（RNASEL），导致病毒RNA的降解和病毒复制的抑制。干扰素作用于靶细胞膜表面的受体后,通过信号转导系统诱导一系列抗病毒蛋白产生,干扰病毒复制以达到抗病毒目的。2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)是干扰素作用于细胞后产生的一种重要的抗病毒蛋白,几十年来,国内外学者对OAS家族及其抗病毒机制进行了大量研究并取得了一定的进展,OAS被dsRNA激活后,催化生成2-5A,2-5A激活核酸内切酶RNase L,降解病毒RNA,阻断病毒蛋白合成,从而发挥抗病毒作用。

应用^[4][5]

用于2’-5’寡腺苷酸合成酶基因启动子介导的重组Caspase-3治疗系统诱导表达HCV核心蛋白HepG2细胞凋亡的体内实验

通过动物体内实验确定2’-5’寡腺苷酸合成酶(2’-5’Oligoadenylate synthetase,OAS)基因启动子介导的重组型Caspase-3治疗系统诱导表达HCV核心蛋白的HepG2细胞凋亡的特异性。方法：首先将pcDNA3.1-HCV-core-EGFP转染HepG2细胞,建立稳定表达HCV核心蛋白的细胞系。然后将转染HCV核心蛋白表达质粒和未转染的HepG2细胞接种裸鼠皮下,待形成肿瘤后,将半乳糖基-壳聚糖-聚乙烯亚胺(galactosylated chitosan-graft-polyethyleneimine,GC-PEI)包被的pcDNA3.1-re-Caspase-3质粒(阳性对照)、pGL3-OAS-re-Caspase-3质粒和空白质粒pcDNA3.1(阴性对照)注入裸鼠皮下肿瘤,48小时后处死动物,取肿瘤。利用HCV核心蛋白抗体检测肿瘤组织中HCV核心蛋白的表达及阳性细胞率。利用抗人的Caspase-3单克隆抗体和HCV核心蛋白抗体对肿瘤组织进行免疫荧光双标记检测,观察导入的重组Caspase-3基因和HCV核心蛋白的表达。TUNEL技术检测HepG2细胞的凋亡率。透射电镜观察HepG2细胞凋亡的形态学改变。

参考文献

[1]Advances in therapy for hepatitis C infection.Zein CO,,Zein NN.Microbes and Infection.2002

[2]Gene transfer of constitutively active caspase-3 induces apoptosis in a human hepatoma cell line.Cam L,Boucquey A,Coulomb-L‘hermine A,Weber A,Horellou P.The Journal of Genetic Medicine.2005

[3]Activation of the interferon-inducible 2‘-5‘-oligoadenylate synthetase gene by hepatitis C virus core protein.Naganuma A,Nozaki A,Tanaka T,Sugiyama K,Takagi H,Mori M,Shimotohno K,Kato N.Journal of Virology.2000

[4]Delivery of DNA into mammalian cells by receptor-mediated endocytosis and gene therapy.Guy J,Drabek D,Antoniou M.Molecular Biotechnology.1995

[5]资源.2'-5'寡腺苷酸合成酶基因启动子介导的重组Caspase-3治疗系统诱导表达HCV核心蛋白HepG2细胞凋亡的体内实验[D].中南大学,2010.