人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)基因编码位于甲羟戊酸途径中分支点的膜相关酶。编码的蛋白质是胆固醇生物合成中的个特定酶，在两步反应中催化两个分子的法呢基二磷酸酯的二聚反应以形成角鲨烯。角鲨烯是一种在人体胆固醇合成等代谢过程中产生的多不饱和烃类，含有6个异戊二烯双键，属于萜类化合物，很多食物中含有角鲨烯，其中鲨鱼肝油中含量较高，在橄榄油和米糠油等少数几种植物油中角鲨烯含量也相对较高。

应用^[4][5]

用于FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及对牛胎儿成纤维细胞胆固醇代谢的影响研究

FDFT1基因(Farnesyl-Diphosphate Farnesyltransferase 1),法尼基二磷酸法尼基转移酶1)是胆固醇代谢通路中的重要基因。为进一步研究FDFT1基因在胆固醇代谢和脂质代谢中的作用,本研究构建了带有绿色荧光标记的FDFT1基因shRNA干扰载体以及过表达载体,将其转染牛胎儿成纤维细胞(Bovine Fetal Fibroblasts,BFF),采用荧光定量PCR和Western blot的方法,检测FDFT1基因mRNA和蛋白的表达水平,在细胞水平验证了shRNA干扰载体的干扰效率和过表达载体的有效性。

使用成功构建的载体干扰或是过表达FDFT1基因后,对FDFT1基因所在通路的上下游、胆固醇生物合成、胆固醇代谢和胆固醇转运相关基因的表达量分析,更深层次揭示了FDFT1基因在胆固醇合成、代谢和转运间的作用。通过对胆固醇和甘油三酯的含量测试也可以了解到FDFT1基因在脂质代谢中的作用。结果表明,shRNA组FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表达水平降低至shRNA NC组的40.7%(p<0.01),蛋白质表达水平降低至shRNA NC组的39.61%(p<0.01);而FDFT1基因pBI-CMV3-FDFT1过表达组FDFT1基因mRNA的表达水平为pBI-CMV3空载体组的137.9倍(p<0.01),蛋白表达水平升高至空载体组的2.34倍(p<0.01)。

参考文献

[1]microRNAs in lipoprotein metabolism and cardiometabolic disorders[J].Noemi Rotllan,Nathan Price,Paramita Pati,Leigh Goedeke,Carlos Fernández-Hernando.Atherosclerosis.2016

[2]miRNA and cholesterol homeostasis[J].Tae-Il Jeon,Timothy F.Osborne.BBA-Molecular and Cell Biology of Lipids.2016

[3]Alterations of a Cellular Cholesterol Metabolism Network Are a Molecular Feature of Obesity-Related Type 2 Diabetes and Cardiovascular Disease[J].Ding,Jingzhong,Reynolds,Lindsay M,Zeller,Tanja,Müller,Christian,Lohman,Kurt,Nicklas,Barbara J,Kritchevsky,Stephen B,Huang,Zhiqing,de la Fuente,Alberto,Soranzo,Nicola,Settlage,Robert E,Chuang,Chia-Chi,Howard,Timothy,Xu,Ning,Goodarzi,Mark O,Chen,Y-D Ida,Rotter,Jerome I,Siscovick,David S,Parks,John S,Murphy,Susan,Jacobs,David R,Post,Wendy,Tracy,Russell P,Wild,Philipp S,Blankenberg,Stefan,Hoeschele,Ina,Herrington,David,McCall,Charles E,Liu,Yongmei.Diabetes.2015(10)

[4]Farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1 regulates hepatitis C virus propagation[J].Eun-Mee Park,Lam N.Nguyen,Yun-Sook Lim,Soon B.Hwang.FEBS Letters.2014(9)

[5]东雪.FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及对牛胎儿成纤维细胞胆固醇代谢的影响[D].吉林农业大学,2017.