大鼠氧化低密度脂蛋白(OXLDL)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠氧化低密度脂蛋白(OXLDL)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠OxLDL抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的大鼠OxLDL与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠OxLDL抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠OxLDL抗体与结合在包被抗体上的大鼠OxLDL结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，大鼠OxLDL浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠OxLDL的浓度。

天然的低密度脂蛋白（LDL）经氧化修饰形成的脂蛋白，称为氧化低密度脂蛋白（OxLDL）。天然LDL核心的脂肪酸中含有大量不饱和脂肪酸约占LDL总脂肪酸含量的35%～70%，所以容易发生自身氧化。LDL中的PUFAs在自由基或其他氧化剂作用下，生成脂类自由基，并能产生更多的过氧化脂质，引起连锁的自由基链式反应，最终生成多种反应性的醛。这些化学性质活泼的醛和ApoB发生结合，产生新的抗原决定簇，形成氧化LDL。OxLDL与动脉粥样硬化关系密切。OxLDL通过以上多种途径在动脉粥样硬化的起始和进展中发挥了举足轻重的作用。既然OxLDL和动脉粥样硬化的关系如此密切，那么抗LDL的氧化修饰就成为阻断动脉粥样硬化进程的关键环节。有可靠的证据表明LDL的氧化修饰，只有在LDL内源性、亲脂性抗氧化剂消耗殆尽后才会发生，其中维生素E作为线抗氧化剂，β-胡罗卜素作为抗LDL氧化的最后一层屏障。如果的确是这样，就可以解释摄食的抗氧化剂的血浆水平为什么和心血管疾病的危险性呈负相关。流行病学研究也进一步表明血浆中维生素E水平高的人群，心血管疾病患病的危险性低。这些研究给动脉粥样硬化的预防和治疗提供了新的思路。

应用^[4][5]

用于血凝素样氧化低密度脂蛋白受体LOX-1在人肾小球系膜细胞和糖尿病大鼠肾脏皮质中的表达研究

大量研究发现血浆中ox-LDL水平与动脉粥样硬化和肾小球硬化的发生相关，提示ox-LDL在DN的进展中发挥着重要作用。研究发现，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）可以驱化炎性细胞聚集并黏附到血管壁，诱导内皮细胞／肾小球系膜细胞凋亡或增殖，有很强的毒性作用。Ox-LDL被其清除性受体清除。随着研究的深入，越来越多的ox-LDL受体不断被人们发现，包括传统的SR-AⅠ／Ⅱ，CD36，SR-B1，CD68和SR-EC。血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor，LOX-1）因特异性地与ox-LDL结合，参与动脉粥样硬化的进展，逐渐引起人们的兴趣。LOX-1是日本学者Tatsuya Sawamural997年使用分子克隆文库的方法在小牛血管内皮细胞中克隆出来的一种新型ox-LDL清除性受体。生理条件下，LOX-1能够清除破损或凋亡的细胞碎片、病原微生物或其他相应物质，在宿主防御中发挥作用。在病理条件下，LOX-1能被像TNF-α、TGF-β1、内皮素、佛波酯醇、血管紧张素Ⅱ、ox-LDL及流体切应力等致炎物质刺激上调，激活内皮细胞，使平滑肌细胞转化，使脂质在巨噬细胞中堆积，在血管的炎性反应和动脉粥样硬化发生发展中发挥重要作用。

参考文献

[1]Simvastatin Acutely Reduces Myocardial Reperfusion Injury In Vivo by Activating the Phosphatidylinositide 3-Kinase/Akt Pathway[J].Sebastian Wolfrum,Andreas Dendorfer,Morten Schutt,Britta Weidtmann,Angelika Heep,Klaus Tempel,Harald H Klein,Peter Dominiak,Gert Richardt.Journal of Cardiovascular Pharmacology.2004(3)

[2]Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1(LOX-1)serves as an endothelial receptor for advanced glycation end products(AGE)[J].Tadashi Jono,Akira Miyazaki,Ryoji Nagai,Tatsuya Sawamura,Toshinori Kitamura,Seikoh Horiuchi.FEBS Letters.2002(1)

[3]Lectin-Like Oxidized Low-Density Lipoprotein Receptor-1(LOX-1)in Atherogenesis[J].Noriaki Kume,Toru Kita.Trends in Cardiovascular Medicine.2001(1)

[4]Requirements of basic amino acid residues within the lectin-like domain of LOX-1 for the binding of oxidized low-density lipoprotein[J].Mingyi Chen,Kazuhiko Inoue,Shuh Narumiya,Tomoh Masaki,Tatsuya Sawamura.FEBS Letters.2001(3)

[5]李萍.血凝素样氧化低密度脂蛋白受体LOX-1在人肾小球系膜细胞和糖尿病大鼠肾脏皮质中的表达研究[D].中国医科大学,2006.