二乙酰胺三氮脒的制备方法

背景及概述^[1][4]

乙酰胺三氮脒属于芳香双脒类，是传统使用的广谱抗血液原虫药，如对家畜梨形虫、锥虫和无形体均有治疗作用，但预防效果较差。

制备方法^[1]

具体生产方法为：以对硝基苯甲酸为原料，在高温下与对甲苯磺酰胺发生氰化反应，生成对硝基苯腈(C7H4N202[619-72-7]。然后由对硝基苯腈加成、胺化、还原、重氮化、偶合、成盐而得二乙酰胺三氮脒。(1)、加成、胺化，将对硝基苯腈、甲醇、甲醇钠加入反应锅，搅拌溶解，在25-30℃反应3h。加入氯化铵，在10-15℃搅拌反应5h。回收甲醇至干，加入稀盐酸煮沸，过滤，得对硝基苯脒盐酸盐溶液；(2)、还原，将上述溶液加热至50℃，加入冰醋酸，于60℃慢慢加入铁粉。加毕，升温至105℃反应5h。过滤，滤液用氢氧化钠溶液碱化至pH为12。过滤，用盐酸将滤液重新酸化至pH为1-2。浓缩，冷却结晶，过滤，得对氨基苯脒盐酸盐；(3)、重氮化、偶合，先将一半量的对氨基苯脒盐酸盐加入水中，加盐酸溶解，于-5-0℃滴加10％的亚硝酸钠溶液，用碘化钾淀粉试纸检查终点，将另一半量的对氨基苯脒盐酸盐加少量水混匀后加入，再加饱和乙酸钠，析出黄色沉淀。过滤，滤饼溶于水中，用10％氢氧化钠溶液调节pH至9-10，析出结晶。甩滤。将滤饼加入反应釜中，加400kg纯化水，搅拌，升温，于50-65℃溶解，再降至0℃，用10％氢氧化钠溶液调节pH9-10，甩滤，60℃烘干得即得1，3-双(对脒基苯)-三氮烯；(4)、成盐，将上述三氮烯、乙酰甘氨酸、甲醇搅拌0.5h后，用氨水调节至pH为7，升温回渡溶解。加活性炭，过滤，滤液冷却结晶。过滤、干燥，得二乙酰胺三氮脒。

药理作用^[2]

对家畜的锥虫、梨形虫及边虫(无形体)均有作用。用药后血中浓度高，但持续时间较短，故主要用于治疗，预防效果差。其作用机理是选择性地阻断锥虫动基体的DNA合成或复制，并与细胞核产生不可逆性结合，从而使锥虫的动基体消失，并不能分裂繁殖。

临床应用^[2]

对家畜的锥虫、梨形虫及边虫(无形体)均有作用。用药后血中浓度高，但持续时间较短，故主要用于治疗，预防效果差。其作用机理是选择性地阻断锥虫动基体的DNA合成或复制，并与细胞核产生不可逆性结合，从而使锥虫的动基体消失，并不能分裂繁殖。

残留检测^[3]

二乙酰胺三氮脒是目前比较常用的新型抗血液原虫药，主要使用对象为泌乳期的奶牛，不合理的使用会造成生鲜乳中兽药残留，存在一定的安全风险。

一种测定二乙酰胺三氮脒含量的方法，具体检测步骤如下所示：

步骤一、于待测物中加入酸化乙腈溶液，均质，提取0.5-5分钟后，离心2-20分钟；酸化乙腈可以为甲酸乙腈、乙酸乙腈、丙酸乙腈等各类酸化乙腈溶液。优选提取0.5-1.5分钟，离心3-6分钟。在步骤一中，该均质、和/或提取、和/或离心的过程可以为一次或多次，优选为2-3次。

采用酸化的乙腈可以很好地沉淀乳制品的蛋白质，其分离效果极好。

步骤二、取上清液加载到固相萃取柱中，依次采用至少一次的碱液、至少一次的醇溶液、至少一次的酸化醇溶液洗脱，收集全部洗脱液；固相萃取柱可以选自弱阳离子交换柱，当采用弱阳离子交换柱时，需用酸性溶液洗脱待测物品。在本发明的具体操作过程中发现，选用酸性溶液洗脱待测物较其他溶剂洗脱效果好。该上清液的取用量为总量的50-90％。该碱液、醇溶液和酸化醇溶液的用量为上清液的0.5-5倍。该碱液、醇溶液和酸化醇溶液的体积比为1:0.8-1.5:0.8-1.5。

步骤三、洗脱液在30-60℃的温度下，经由保护气干燥浓缩(如：氮气等保护气吹干等方式)，用酸和乙腈的混合水溶液定容；酸和乙腈的混合水溶液用量，按检测的需要进行配置，或按浓度比例进行配置。

步骤四、过滤后，采用液相色谱质谱联用法对其进行定量分析；该过滤方式可以为膜过滤、以石英砂、硅胶、海藻砂、滤纸等为介质的过滤。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201310539401.X 一种三氮脒的生产方法

[2] 注射用三氮脒说明书

[3] [中国发明,中国发明授权] CN201610976684.8 一种测定乳制品中三氮脒含量的方法