组织蛋白裂解液的使用注意事项

概述^[1]

采用各种表面活性剂和蛋白变性剂使样品快速充分破裂，从而释放蛋白质，内含作用强烈的蛋白酶抑制剂，从而保证了蛋白的完整。组织蛋白裂解液适用于动物组织蛋白质的变性提取，提取的蛋白质可以用于SDS-PAGE和Western blot 等实验。

运输和保存条件

常温下运输，收到后将溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存，溶液B在-20℃环境中保存，保质期两年。

操作步骤^[1] 

1. 每100 mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm×3 mm左右的小块，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入1 mL 冷溶液A 和10 μL溶液B，4℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50次。或超声破碎细胞，每次30 sec，3～4次，每次间隔1 min，置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％,并且没有明显的组织小块。

2. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置20min左右，期间取出剧烈震荡2-3 次。再10000 rpm，4℃离心5 min。

3. 取上清转移至新的预冷的离心管中，进行蛋白定量。

4. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。

使用注意事项^[1] 

1. 溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存，如果产生沉淀，可以加热到50℃温浴5 min，使得充分溶解。

2. 充分裂解后溶液是很透明而且不太粘的，如果裂解后溶液比较粘，可以使用超声破碎仪，延长破碎的次数。

3. 裂解液中有较高浓度的去垢剂，不建议使用普通的Bradford 法，但可用BCA 法（ C503021）或改良Lowry 法（ C504041） 测定蛋白浓度。

4. 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。

主要参考文献

[1] 罗旭光 藏好晶 孙鹏 曹锡梅；筛选适合酸中毒小鼠骨骼肌组织蛋白提取的裂解液。《中国组织工程研究》2019年 第14期。