生物素-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

背景^[1]

生物素-标记羊抗兔免疫球蛋白(H+L)是将羊抗兔免疫球蛋白(H+L)进行生物素化标记制成的荧光标记二抗，许多生物素分子可以与第二抗体偶联，而链霉亲和素的另一优点是对生物素具有高亲和力。

通过该扩增步骤并使抗生蛋白链菌素与标记物（例如HRP或荧光探针）结合，更有可能检测到低水平表达的蛋白质。对于大多数测定，首先添加生物素标记的第二抗体，然后依次加入与标记物（例如HRP）偶联的链霉亲和素。Biotin（生物素）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244。31kD。随着各种生物素衍生物的问世，生物素-亲合素系统（Biotin-Avidin System，BAS）很快被广泛应用于医学各领域。

相关研究^[2-3]

近年大量研究证实，生物素—亲合素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。在生物素-亲和素系统中，借助所形成的亲和素-生物素-酶复合物，追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检出相应的抗体或抗原。由于抗原或抗体分子可偶联多个生物素，且1个亲和素分子可结合4个生物素分子，组成新的生物放大系统，进一步提高检测的灵敏度。由于BAS亲和力高，所以具有高灵敏度、高特异性和稳定性等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛应用，并显示出明显的优越性。已报道有用于放射免疫、免疫荧光和免疫电镜等技术中，但应用更多的还是在酶免疫技术中。

应用^[4][5]

用于电化学免疫传感器在肿瘤标志物检测中的应用研究

以肝癌血清标志物—甲胎蛋白为检测对象,构建了种具有高灵敏性的电化学免疫传感器,并对其临床结果进行了初步评价,主要内容如下：成功构建了一种基于单抗多抗夹心体系的高灵敏、制备简单的便携式多通量电化学免疫传感阵列并用于AFP定量检测。采用物理吸附的方法将捕获探针抗体固定在印刷电极芯片上,用更简单的方法得到了比共价耦联更好的抗体组装效率及抗体组装量。随后在靶蛋白和信号探针及多克隆抗体分别反应后,酶标二抗就可以连接,利用便携式多通道电化学仪检测辣根过氧化物酶催化底物的氧化还原电流就可以实现检测。在此基础上,又引入了Poly-HRP放大技术,将标记有羊抗兔IgG的超分子多聚HRP酶复合物作为信号的载体,可有效增强免疫反应电流响应的信号,提高了传感器的检测灵敏度。实验结果对AFP检测限达到56pg/ml,同时有两个线性范围,低浓度区间为64p-1000p,高浓度区间为1n-250n。该传感器具有灵敏度高、线性范围宽等特点,实现了微量AFP的定量检测。表明该传感器在HCC的诊断及AFP检测方面具有进一步的应用前景。

参考文献

[1]A novel liquid-phase piezoelectric immunosensor for detecting Schistosoma japonicum circulating antigen[J].Zhili Wen,Shiping Wang,Zhaoyang Wu,Guoli Shen.Parasitology International.2011(3)

[2]Hepatocellular Carcinoma:Screening and Staging[J].Morris Sherman.Clinics in Liver Disease.2011(2)

[3]Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid,quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein[J].Qiuhua Yang,Xiaoqun Gong,Tao Song,Jiumin Yang,Shengjiang Zhu,Yunhong Li,Ye Cui,Yingxin Li,Bingbo Zhang,Jin Chang.Biosensors and Bioelectronics.2011(1)

[4]A DNA Nanostructure‐based Biomolecular Probe Carrier Platform for Electrochemical Biosensing[J].HaoPei,NaLu,YanliWen,ShipingSong,YanLiu,HaoYan,ChunhaiFan.Adv.Mater..2010(42)

[5]李胜昔.电化学免疫传感器在肿瘤标志物检测中的应用研究[D].复旦大学,2012.