木栓酮的制备及药理作用

背景及概述^[1][2]

木栓酮(Friedelin)是一种典型的三萜类化合物，属于木栓烷型五环三萜，为白色针状结晶，熔点263-263.5℃，能溶于氯仿、石油醚等有机溶剂，不溶于水。木栓酮具有广泛的生物活性和医疗应用，如抗炎、镇痛、抗氧化、自由基清除以及良好的抑制致病细菌和真菌作用。木栓酮还具有杀虫作用，可以应用于植物保护。木栓酮存在许多植物中，如卫矛科植物卫矛的全草，大戟科植物重阳木的茎，石蕊科植物雀儿石蕊的枝状体等植物。

制备^[1]

方法一、一种从甜茶老叶中提取木栓酮的方法，包括以下步骤：

(1)将150g茶叶粉末放入2000mL的圆底烧瓶中，加入900mL的95％乙醇，在40℃条件下恒温浸提24h；经抽滤后，对滤渣重复提取三次，合并提取液。

(2)将步骤(1)提取液减压浓缩蒸去乙醇，得到37.72g浸膏。

(3)将步骤(2)浸膏分散在200mL蒸馏水中，加入200mL石油醚萃取分层，共萃取三次，合并萃取相，再减压浓缩蒸去石油醚，得到石油醚萃取相浸膏2.13g。

(4)将步骤(3)石油醚萃取相进行硅胶柱层析，使用乙酸乙酯：石油醚＝1：15～10进行梯度洗脱，得有效馏分。

(5)将步骤(4)有效馏分减压蒸发除去其中的石油醚和乙酸乙酯，边滴加石油醚边搅拌并加热，至所有粗品均能溶解，迅速趁热滤去不溶性杂质，在0℃的条件下冷却后，得白色晶体53mg，即木栓酮。

方法二、竹茹粗粉为原料，取1kg，加入5倍量正己烷，加热回流提取4次，每次2h，合并提取液，浓缩至浸膏，用70％的乙醇洗涤，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液浓缩至小体积，加入适量硅胶，搅拌均匀，干法上硅胶柱，依次用8∶1、19∶1、24∶1、47∶1氯仿-甲醇混合溶液洗脱，收集富含木栓酮成分的洗脱液，洗脱液脱溶后用乙醇回流溶解，放冷结晶，重复2次，滤出结晶干燥即得木栓酮产品3.1g，含量为92.7％。

含量测定^[3]

姚晓宝等人建立了竹茹中主要的五环三萜类化合物木栓酮的提取和气相色谱测定方法。方法:竹茹粉末用正己烷热回流提取8h,得正己烷萃取物;气相色谱条件:FID检测器,HP-5色谱柱(5%phenylmethylsiloxane,30m×0.25mm×0.25μm)、柱温从140℃以20℃·min-1升温到280℃,保持22min。结果:提取方法有效,淡竹茹中木栓酮含量为0.688%;木栓酮检出限为1.01μg·mL-1,定量限为4.06μg·mL-1,回收率为101.1%,RSD为2.3%。结论:提取方法简单,检测方法灵敏、重现性好,为竹茹的质量评价和品质控制提供了可量化的参数。

体内研究^[4]

林之蔚等人为了解三萜类化合物在体内的结合转运机制,采用荧光光谱法结合紫外吸收光谱研究从中药爵床中分离的有效成分木栓酮(Friedelin,FDL)与牛血清白蛋白(Bovineserumalbumin,BSA)的结合反应。通过研究木栓酮对牛血清白蛋白内源性荧光的淬灭作用,发现木栓酮可以与牛血清白蛋白相互结合,且其作用是一个静态猝灭的过程.通过计算木栓酮与牛血清白蛋白的结合常数和结合位点,发现在生理弱碱性溶液中二者具有较强的结合作用,且以1:1结合。根据热力学参数推测木栓酮与牛血清白蛋白的作用力类型为氢键和范德华力。根据Frster非辐射能量转移机理,计算出木栓酮与牛血清白蛋白结合距离为2.86nm。研究表明木栓酮在体内可以通过血清白蛋白进行结合和转运。

药理作用^[5]

张嵘等人观察了木栓酮对人慢性髓系白血病(CML)细胞株K562增殖和细胞周期的影响和机制。方法将K562细胞分为对照组和木栓酮组,木栓酮组包括10、20、50、100μmol/L组,培养24、48、72h。采用四甲基固氮唑盐(MTT)法测定木栓酮对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测木栓酮对K562细胞细胞周期的影响。实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)mRNA表达水平。蛋白印迹法检测细胞中CDK1蛋白表达水平。结果50μmol/L木栓酮组和100μmol/L木栓酮组K562细胞的增殖抑制率明显高于对照组,并具有一定的时间和剂量依赖性。进一步研究发现,50μmol/L和100μmol/L木栓酮可以阻滞细胞周期于G0/G1期。高浓度木栓酮作用后,CDK1mRNA及蛋白表达均明显低于对照组。结论木栓酮能够抑制K562细胞的增殖,并使K562细胞周期阻滞在G2期,其机制可能与下调CDK1的表达有关。

主要参考资料

[1][中国发明]CN201711335654.X一种从甜茶老叶中分离提纯木栓酮的方法

[2][中国发明]CN201010603996.7一种木栓酮的制备方法

[3]姚晓宝,吴晓琴,张英.气相色谱法测定竹茹中三萜化合物木栓酮的含量[J].药物分析杂志,2004,24(04):387-390.

[4]林之蔚,邰正福,万忠民,王飞,雷泞菲.荧光光谱法研究木栓酮与牛血清白蛋白的相互作用[J].应用与环境生物学报,2012,18(02):287-291.

[5]张嵘,刘卓刚.木栓酮调控K562细胞增殖和细胞周期机制的初步研究[J].山西医药杂志,2012,41(11):1093-1095.