醋酸特利加压素的应用和制备

背景及概述^[1][2]

醋酸特利加压素是一种人工合成的长效血管加压素制剂，为垂体后叶分泌激素的类似物，它是一种前体药物，自身几乎没有药理作用，在体内其三甘氨酰基被酶切除，从而缓慢释放活性代谢产物赖氨酸加压素，发挥临床疗效，且通过注射给药方便。醋酸特利加压素用于肝硬化并发症(食管胃静脉曲张出血、肝肾综合症、腹水)的治疗，同时还适用于泌尿生殖道及其他腹腔脏器出血、感染性休克、烧伤、急性肝功能衰竭、心脏骤停等。特利加压素能改善肝肾功能，逆转HRS，延长HRS患者的生存时间，故延长肝移植的等待时间。同时，特利加压素是食管静脉曲张出血患者在紧急情况下的重要治疗药物，是唯一被证明延长食管静脉曲张出血患者生存时间的药物。此外特利加压素在治疗难治性休克、肝硬化腹水、手术中低血压及小儿心脏骤停有一定作用，具有良好的临床应用前景。

制备^[1]

一种醋酸特利加压素的合成方法，醋酸特利加压素肽树脂的制备是采用RinkAmide-MBHAresin(0.67mmol/g)，产于西安蓝晓科技新材料股份有限公司，合成规模为10.05mmol，需15gRinkAmide-MBHAresin(0.67mmol/g)。所需的RinkAmide-MBHAresin(0.67mmol/g)的重量(g)＝合成规模(mmol)/树脂替代度(mmol/g)。

(1)脱除RinkAmide-MBHAresin树脂上的Fmoc保护基团

选择合适大小的反应柱，并确保柱子清洁干燥。DCM需提前加无水K2CO3干燥。称取15g的RinkAmide-MBHAresin(0.67mmol/g)倒入反应柱中，加入300mLDCM溶涨约10min。待溶涨时间截止后，抽掉DCM，加入200mLDBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，时间分别是5min和15min，两次脱帽反应之间用200mLDMF洗涤，抽掉DMF洗涤液。待脱帽反应后按照如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗完后抽掉洗涤液。通过kaiser检测显阳性，制备得脱除Fmoc保护基团的RinkAmide-MBHAresin树脂，进入下一步氨基酸单体偶联循环反应。

(2)第1位氨基酸单体的偶联反应

称取6.0±0.1gFmoc-Gly-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后值得混合溶液，将装有所述混合溶液的烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起。在20～35℃温度条件下反应时间3～4h后，取样kaiser检测，若显阴性，表明偶联反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。向所述步骤(2)的产物加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗完后抽掉，kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取12±0.1gFmoc-Pro-Lys(Boc)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应时间3～4h，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(4)第4位氨基酸单体的偶联反应

向所述步骤(3)的产物加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗完后抽掉，kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取12±0.1gFmoc-Cys(Trt)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(5)第5位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(4)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗完后抽掉，kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取12±0.1gFmoc-Asn(Trt)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤1min左右，进入下一步偶联循环。

(6)第6位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(5)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉，kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取12±0.1gFmoc-Gln(Trt)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全。可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(7)第7位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(6)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱保护之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉。kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取8±0.1gFmoc-Phe-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后再加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(8)第8位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(7)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。两次脱完保护抽掉后，按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉。kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取9.2±0.1gFmoc-Tyr(tBu)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后在加入3gDIC于溶液中活化5min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(9)第9位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(8)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱保护之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤一次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉，kaiser检测显阳性。在脱帽反应的间隙，称取12±0.1gFmoc-Cys(Trt)-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后在加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取kaiser检测，显阴性，则反应完全，可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，进入下一步偶联循环。

(10)第10～12位氨基酸单体的偶联反应

向步骤(9)产物中加入150mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH、DCM和DMF各洗涤次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉。kaiser检测显阳性。在脱保护的间隙，称取8.2±0.1gFmoc-Gly-Gly-Gly-OH和3.2±0.1gHOBt置烧杯中，加入150mLDMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冰浴10min，然后在加入3gDIC于溶液中活化30min后，将反应液倒入反应柱中，调节好N2，使树脂被均匀吹起，在20～35℃温度条件下反应3～4h后，取样kaiser检测，显阴性，则反应完全。可抽掉反应液，加入200mLDMF洗涤2遍，每次洗涤5min左右，最终制得线性十二肽树脂。

将步骤A制备的线性十二肽树脂加入到反应柱中，用二氯甲烷溶胀30min，称取固体碘12.8g，加入至DMF中搅拌溶解制成I2/DMF溶液。将配好的I2/DMF溶液加入到溶胀好的肽树脂中反应4h。反应结束，加入200mL的DBLK(20％哌啶/DMF溶液)2进行脱帽反应2次，次为5min，第二次为15min，两次脱帽反应之间需加入约200mL的DMF洗涤5min，抽掉洗涤液。按如下洗涤剂顺序DMF、DMF、MeOH和DCM各洗涤次，每次洗涤试剂用量约200mL，洗涤时间为5min，洗完后抽掉。kaiser检测显阳性。再用200mLMeOH收缩两次，两次收缩时间依次为5min和10min，收缩后抽掉。用真空抽干至树脂呈流沙状。

步骤C，将步骤B制备的样品通过裂解反应制得环化十二肽的粗肽裂解液、再经提纯制得精制特利加压素：

(1)先裂解试剂配比为TFA：EDT：TIS：H2O＝92.5：2.5：2.5：2.5，按1g环化十二肽树脂需8mL裂解试剂配比，室温裂解，裂解反应时间为4h；按上述裂解方案配120mL裂解液(TFA：111mLEDT、水和TIS各3mL)于250mL的圆底烧瓶中，塞上玻璃塞，放冰箱冷冻30min；

裂解液冷冻完后拿出冰箱，放入搅拌子。将15g肽树脂缓缓加入到裂解液中，待全部加完后计时，室温裂解3～4h，制得粗肽裂解液。

(2)上述粗肽裂解液通过冰冻MTBE溶液进行沉降，然后经过滤、洗涤、干燥制备得特利加压素粗品，具体为：用砂芯漏斗将树脂滤掉，得到含多肽的裂解液。将含多肽的裂解液缓缓加入到500mL的冰MTBE中，会有白色的固体粗肽析出，静置30min后过滤，用冰的MTBE洗涤3次，经在35～50℃干燥至恒重，制得特利加压素粗品(即环化十二肽粗肽)。

(3)将所述特利加压素粗品依次经液相色谱分离纯化、冻干制得精制醋酸特利加压素成品，采用DIONEXP680高效液相色谱仪，经常规纯化、冻干法制得精制粗醋酸特利加压素：将所述特利加压素粗品经C18柱进行纯化；流动相：A相：1‰TFA，B相：100％乙腈；流速：400mL/min，检测波长：λ＝230nm；将纯化后的溶液通过旋转蒸发仪减压旋去乙腈、冷凝处理制备得一纯特利加压素样品；将一纯特利加压素样品经C18柱进行纯化；流动相：A相：依次用50mmol/L的NH4Ac水溶液和0.03％HAc水溶液进行脱洗，B相：100％乙腈；流速：400mL/min，检测波长：λ＝230nm；将纯化后的溶液通过旋转蒸发仪减压旋去乙腈、冷凝浓缩处理制备得特利加压素浓缩液；将特利加压素浓缩液在-10℃～-40℃温度条件下进行预冻；然后将预冻后的样品进行温度梯度升华干燥处理和解吸附处理制备得精制醋酸特利加压素成品。

药理作用^[2]

醋酸特利加压素为赖氨酸加压素的前体，本身无活性，在体内缓慢转化为赖氨酸加压素后而发挥加压素的生理活性。收缩内脏血管，使内脏血流量减少，门静脉血流量随之减少，门静脉压下降。对动脉血压影响较小，也不会增加纤溶作用。静注后25～40分钟起效，持续2～10小时，分布半衰期8～9分钟。主要在肝、肾代谢，其代谢产物即为具活性的赖氨酸加压素。清除半衰期为51～66分钟。

临床应用 ^[3]

1. 特利加压素对肝肾综合征的临床治疗

肝肾综合征(Hepatorenalsyndrome，HRS)常出现于严重肝病患者病程后期，主要表现为进行性少尿或无尿、血尿素氮及肌酐升高等，但肾脏病理检查无明显器质性病变，是一种进行性、功能性的肾功能不全。一般见于肝硬化晚期患者或急性肝衰竭患者，一般预后很差。尤其是Ⅰ型HRS，大大缩短了患者的存活时间。目前，肝移植是HRS患者首选的治疗方案，但是治疗费用很高，对患者家庭造成沉重的经济负担。由于肝源有限，等待适合的肝脏需要很长时间，Ⅰ型HRS患者没有足够的时间等待。除了肝移植之外，人工肝可以作为抢救HRS的有效的方法，然而，人工肝只是一种临时手段，帮助患者延长生命，等待肝移植，而且，人工肝在临床应用中费用很高，管理过程复杂，很容易引起并发症。因此，找到可以逆转HRS药物，为肝移植赢取时间，具有重要的临床意义。

2. 特利加压素治疗HRS的作用机制

HRS的发病机制目前没有确定说法，最受认可的发病机制是由于严重的肝功能障碍导致肾脏的血流动力学改变。肾血管收缩和肾内分流，致使肾血流量(RBF)减少，肾小球滤过率(GFR)下降，从而引起肾功能衰竭。同时，肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosteronesystem，RAAS)和交感神经系统(sSNS)被激活，RAAS和SNS的活化，引起水钠潴留，肾小球滤过率受损，肾功能受损加剧。通过特利加压素和白蛋白治疗Ⅰ型HRS患者的研究，发现血清中的胆红素浓度可以作为有效的独立预测因子，尿量、血肌酐、白细胞计数可以作为HRS患者肾功能改善的独立预测因子。研究表明，通过特利加压素一定时间的治疗，患者的肌酐清除率明显增加，肌酐的血清水平有效下降，可达到1.5mg/dl。特利加压素可通过对胃肠道毛细血管床的收缩作用，降低血浆肾素浓度，达到血管紧张素Ⅱ产生量降低的作用，有助于肾脏血流灌注的增加，肾小球滤过率得到提高，尿量明显恢复，肾功能得到改善。

3. 特利加压素对食管静脉曲张出血的治疗作用

肝硬化门静脉高压症引起的并发症中，食管静脉曲张破裂出血是最严重的。经研究发现，特利加压素可有效提高患者生存率。特利加压素在食管静脉曲张出血的治疗中具有不可替代的作用，通过有效的止血作用，降低复发率，达到减少食管静脉曲张患者的病死率的目的，且能支持内窥镜的治疗。

4. 对难治性休克的治疗作用

严重感染的病死率高达30%~70%，对多巴胺、去甲肾上腺素无反应的感染性休克死亡率更高。脓毒血症所致的难治性休克病死率高达50%~70%。此类患者经过特利加压素治疗后，平均动脉压及左室和右室搏出功增加，肾功能得到一定恢复。对12例脓毒血症休克患者的研究显示，患者先经多巴胺、去甲肾上腺素治疗，患者并无明显改善。改用特利加压素2μg/(kg·h)，在用药后的6、12、24h，对患者的心率、平均动脉压、休克指数和尿量变化进行检测并记录结果。结果用药后6h的检测结果显示，平均动脉压升高、休克指数下降，用药后12h的检测结果显示，心率、尿量恢复明显。但是，当剂量>2μg/(kg·h)时，特利加压素有引起患者四肢末梢循环障碍的作用，临床上应注意使用剂量。张英[7]等对16例感染性休克病例进行研究，患者接受多巴胺和去甲肾上腺素治疗后，血压仍无法维持，为患者加用了特利加压素。用药后6h，16例患者平均动脉压及休克指数均有所恢复，用药后与用药前比较差异显著(P0.05)，用药后12h及24h对心率和尿量的检测结果显示，用药前后差异均显著。

主要用途和用法^[2]

醋酸特利加压素主要用于食管胃底静脉曲张破裂出血。静注，1～2mgq4～6h，直至出血控制。

不良反应及注意事项^[2]

少数病人有腹部绞痛、头痛、面色苍白及血压升高等。孕妇、儿童禁用。高血压、重度动脉粥样硬化、冠心病、心律失常、哮喘及肾功能不全等病人慎用。

主要参考资料

[1] CN201710252321.4一种醋酸特利加压素的合成方法

[2] 临床用药速查手册

[3] 醋酸特利加压素的研究进展