CD160分子(CD160)重组蛋白的相关研究
发布日期:2020/2/13 14:44:24
背景及概述[1]
CD160分子是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白，又名BY55，最早发现于NK细胞表面。CD160基因定位于人染色体1q21.1区域，其蛋白分子量是一个27kda的糖蛋白。其开放阅读框由181个氨基酸组成，与NK细胞表面杀伤抑制性受体KIR有较弱的同源性，经典和非经典MHCI类分子与CDl60具有较低的亲和力，这种结合能增强NK细胞和T细胞的细胞毒活性。CD160每条多肽链包含6个半胱氨酸残基，正是这些半胱氨酸在细胞表面以二硫键相互连接形成牢固的多聚体。最近发现在NK细胞中，由于剪接拼接的不同，CD160有三种异构体。目前的研究都是围绕传统的GPI-CD160，其m RNA广泛存在于PBMCs，NK细胞，NKT细胞和T细胞。最近研究结果进一步表明CDl60可以形成含跨膜区和胞内区的剪切异构体，其产生的原因是CDl60的m RNA并没有在GPI基序后的位点剪切，形成的蛋白由19个氨基酸组成的跨膜区和一个由52个氨基酸组成的胞内结构域。重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。CD160分子(CD160)重组蛋白若长期储存，建议添加载体蛋白（0.1％HSA或BSA），并储存在-20~ -80°C，避免多次冻融。
CD160分子(CD160)重组蛋白提高蛋白的可溶性表达比例及表达量方法：
1）密码子优化
密码子优化是根据大肠对密码子的偏好性进行优化筛选，一般选择使用频率大于20%的密码子。经过优化的基因序列能提高mRNA二级结构的稳定性，避免因为不充足的tRNA库导致翻译延迟，成熟前翻译终止，翻译移码和氨基酸错配。
2）降低蛋白表达速率
通过降低IPTG的诱导浓度，降低CD160分子(CD160)重组蛋白的表达速率。通过调节促使肽链聚集的速率与其折叠速率平衡，有利于提高蛋白的可溶性表达。
3）温度
37度的表达条件往往会使一些蛋白形成包涵体，而30度的表达条件则可能产生可溶的或者有活性的CD160分子(CD160)重组蛋白。在某些条件下（12-20度）延长诱导时间（过夜）会使溶解性蛋白的产量达到大。
4）细胞周质表达
可以选用一些将蛋白运输到细胞周质的载体。周质空间更有利于蛋白的正确折叠及二硫键的形成。常规选用的载体有pet22系列。
主要参考资料
[1] 人CD160基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制
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