大鼠神经元烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒的实验原理

概述^[1]

大鼠神经元烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠神经元烯醇化酶（NSE）的含量。

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

大鼠神经元烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。

大鼠神经元烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒组成^[1]

备注：

1.标准品浓度依次为：16、8、4、2、1、0 ng/mL

2.经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。

实验原理^[1]

大鼠神经元烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠神经元烯醇化酶（NSE）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠神经元烯醇化酶（NSE）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求^[1]

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

主要参考文献

[1] 解建波；拉莫三嗪对脑缺血再灌注大鼠血清神经元特异性烯醇化酶与TNF-α的影响。《卒中与神经疾病》2009