醋酸地加瑞克的制备

概述^[1]

醋酸地加瑞克是一种合成的促性腺激素释放激素（GnRH）受体拮抗剂，通过与脑下垂体的GnRH受体可逆的结合，减少促性腺激素及睾酮的释放，从而发挥抗前列腺癌作用。以往激素疗法治疗前列腺癌时初期会造成睾酮浓度激增,由此可能暂时促进肿瘤生长而不是抑制它,但醋酸地加瑞克无此现象。来自比利时法语区鲁汶大学的Bertrand Tombal和来自德国柏林本杰明·富兰克林医疗中心的Kurt Miller对来源于2328例不同国家的前列腺癌患者的荟萃分析研究发现，与接受促黄体生成素释放激素激动剂相比，接受醋酸地加瑞克治疗的患者，总体生存率明显上升，前列腺癌的症状控制得到改善，骨折概率降低，肾脏以及泌尿系统的不良反应减少，还可显著降低心血管事件的风险。

制备^[2]

（1） 取2.0g（1.0mmol）的Rink Amide MBHA (取代度=0.50mmol/g)树脂加入到反应柱中，加入15 mLDCM溶胀30min，去保护：加入15mL的V哌啶:VDMF =20:80混合溶液，搅拌反应5min后抽滤除去液体，再次加入上述混合溶液，搅拌反应10min后抽滤除去液体，如此进行2次脱保护，然后用DMF洗涤6次，每次15mL。 

（2）偶联Fmoc-D-Ala-OH：将0.94g (3.0mmol) Fmoc-D-Ala-OH和0.51g (3.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶剂DMF溶解，冰浴冷却温度为0～10℃，加入465uL (3.0mmol) DIC，激活5分钟后加入到反应柱中与脱完保护的载体进行反应，25-35℃下反应2小时，抽除液体，DMF洗涤3次，每次15mL。

（3）重复偶联：重复去除Fmoc保护基及接肽反应步骤的操作，按照地加瑞克氨基酸序列，依次偶联：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ilys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-4Aph(Dde)-OH、Fmoc-4Aph(Teoc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-3Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH。

（4）醋酐封端：先脱去保护基Fmoc，加入15mL的V哌啶:VDMF =20:80混合溶液，搅拌反应5min后抽滤除去液体，再次加入上述混合溶液，搅拌反应10min后抽滤除去液体，如此进行2次脱保护，然后用DMF洗涤6次，每次15mL。取1mL醋酐、1mL吡啶和1mLDMF，冰浴冷却，缓慢加入载体中，25-35℃下反应2小时，抽除液体，用DMF洗涤6次，每次15mL。

（5）去Dde保护基：加入15mL的V水合肼:VDMF =2:98混合溶液，搅拌反应5min后抽滤除去液体，再次加入上述混合溶液，搅拌反应10min后抽滤除去液体，如此进行2次脱保护，然后用DMF洗涤6次，每次15mL。

（6）偶联Cbm：加入270uL（2mmol）三甲基硅基异氰酸酯的DMF溶液，冰浴冷却，缓慢加入载体中，低温反应2小时，25-35℃下反应24小时，抽除液体，用DMF洗涤3次，每次15mL。

（7）去Teoc保护基：加入1.04g（4mmol）四丁基氟化铵的DMF混合溶液，25-35℃下反应2小时，抽除液体，用DMF洗涤3次，每次15mL。

（8）偶联L-Hor：将0.73g (3.0mmol) L-Hor-OH和0.51g (3.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶剂DMF溶解，冰浴冷却温度为0～10℃，加入465uL (3.0mmol) DIC，激活5分钟后加入到反应柱中与脱完保护的载体进行反应，25-35℃下反应2小时，抽除液体，DMF洗涤3次，每次15mL。

（9）裂解：将上述肽树脂用15mL VTIS:VPhSMe:VTFA=5:5:90裂解液裂解；裂解时间：2小时；过滤，旋蒸，旋蒸母液加入90mL的乙醚中，沉降后离心洗涤5次，每次45mL。制得地加瑞克粗肽1.72g。

（10）次纯化：将色谱柱用50%乙腈冲洗干净后用5%乙腈平衡系统5min，以1-3g/次的上样量进行HPLC纯化，流动相：A为0.1%TFA水溶液; 流动相B为乙腈；梯度程序为:初始状态流动相B为10%，保持5分钟，然后在60分钟内将流动相B比例增至50%;流速为：20 mL／min。于280nm波长处检测，根据色谱峰分段收集馏分，并将收集的馏分用分析液相色谱仪进行检测，纯度≥99.0%且单杂≤0.2%馏分即为步合格馏分。其余为不合格馏分，不合格馏分中纯度大于80%部分再进行回收纯化，纯度小于80%舍弃。

（11）第二次纯化：将色谱柱用50%乙腈冲洗干净后用5%乙腈平衡系统5min，以1-3g/次的上样量进行HPLC纯化，流动相：A为0.3%醋酸水溶液; 流动相B为乙腈；梯度程序为:初始状态流动相B为10%，保持5分钟，然后在60分钟内将流动相B比例增至50%;流速为：20 mL／min。于280nm波长处检测，根据色谱峰分段收集馏分，并将收集的馏分用分析液相色谱仪进行检测，纯度≥99.8%且单杂≤0.1%馏分即为第二步合格馏分。其余为不合格馏分，不合格馏分中纯度大于80%部分再进行回收纯化，纯度小于80%舍弃。

（12）转盐、浓缩及冻干：将色谱柱用50%乙腈冲洗干净后用5%乙腈平衡系统5min，以1-3g/次的上样量进行HPLC纯化，样品加入30%醋酸溶解，按照上述梯度要求进行转盐，于280nm波长处检测，根据色谱峰分段收集馏分，浓缩至20mg/mL左右，冻干后得到醋酸地加瑞克精肽：0.90g，纯度：99.85%，收率：53.1%。

主要参考资料

[1] 姚远兵, 王玲, 夏悦, & 王卓. (2010). 治疗前列腺癌的新型gnrh拮抗剂地加瑞克. 中国新药杂志(3), 179-183.

[2] 厉保秋, 袁强, 陈明鲁, 房世红, 董欣, & 李娜. . 一种地加瑞克的合成方法.

[3] 云晓, 吴四清, 袁剑琳, 张巍, & 陈超. . 一种固相片段法合成地加瑞克.