LOXO-101的制备方法

背景及概述^[1][2]

LOXO-101又名拉罗替尼。传奇抗癌药larotrectinib（LOXO-101）2018年终于获得FDA批准，用于治疗患有NTRK基因融合的局部晚期或转移性实体瘤的成人和儿童患者。由 Loxo Oncology 公司和德国拜耳公司共同研发的靶向原肌球蛋白激酶( tropomyosin related kinase， TRK) 抗肿瘤药物LOXO-101于 2018年 11 月 26 日获美国 FDA 批准上市，剂型为胶囊和口服液，用于治疗具有 NTRK 基因融合的成人和儿童局部晚期或转移性实体瘤，而不需要考虑肿瘤的发生部位。2017年ASCO大会LOXO公司的LOXO-101（Larotrectinib）算是大放光彩了一把，LOXO-101的临床效果着实吸引了很多人的眼球，因为这家有35个员工的公司开发出来了Larotrectinib这个效果惊人的抗肿瘤药物。LOXO-101标靶TRK基因，对成人或儿童患有局部晚期或转移性肿瘤，包括结肠、肺、胰腺、甲状腺、唾液和胃肠癌等17种癌症有效，总缓解率达75%。可以说LOXO-101就是“靶向药版PD-1”。

靶向药用药一段时间后会出现耐药的情况，因此LOXO公司研发了LOXO-195，来解决使用LOXO-101耐药的问题。LOXO-101耐药机理与EGFR情况很像，主要是靶点本身（TRK基因）产生了新的突变，比如TRKA出现G595R突变，或者TRKC出现G623R突变。

LOXO-101是一款针对TRK家族蛋白（包括TRKA，B，C）的靶向药物，很多器官的肿瘤都携带TRK融合基因突变，而且依赖这个突变基因提供生长信号，所以LOXO-101对这些肿瘤都有作用。LOXO-101的中文化学名称: ( 3S) -N-  5-［( 2R) - 2-( 2，5-二氟苯基) - 1-吡咯烷基］吡唑并［1，5-a］嘧啶- 3-基］- 3-羟基- 1-吡咯烷甲酰胺。

原肌球蛋白激酶为一类神经生长因子受体， 是调节细胞通讯和肿瘤生长的重要信号通路， 由高度同源性的激酶 TRK-A、 TRK-B、 TRK-C 组成， 属于 NTRK 基因编码。TRK 融合癌发生在 NTRK 基因与无关基因融合突变时，产生变异的 TRK 蛋白，这些变异的 TRK 融合蛋白持续活跃，触发持续性信号级联， 成为 TRK 融合癌患者肿瘤扩散和生长的主要驱动因子， 而且它并不局限于某些类型的细胞或组织， 可发生在身体的任何部位。LOXO-101是可口服的选择性 TRK 激酶抑制剂， 在体外和体内肿瘤模型中， LOXO-101对 TRK 蛋白激活的细胞或 TRK蛋白过表达的细胞均显示出抗肿瘤活性，而与肿瘤类型无关。

制备^[3]

WO2010048314报道了LOXO-101的合成路线: 仲丁基锂和( - ) -金雀花碱在 -78 ℃ 条件下将 N-Boc-吡咯烷( 1) 对映选择性脱除质子， 随后与 ZnCl₂ 反应生成有机锌化合物，然后在醋酸钯和四氟硼酸三正丁基膦存在下与 2-溴-1，4-二氟苯( 2) 发生 Negishi 偶联得到( R) -N-Boc- 2-(2，5-二氟苯基) 吡咯烷(3) ， 继而用盐酸水溶液脱保护基得到( R) - 2-( 2，5-二氟苯基) 吡咯烷( 4) ，4 在N，N-二异丙基乙胺催化下与 5-氯吡唑并［1，5-a］ 嘧啶(5) 缩合得到 6， 之后用 HNO₂ 硝化得到 7，7 在 Zn 和 NH4 Cl 作用下进行硝基还原得到相应的胺 (8) ，8 和 ( S) - 3-吡 咯 烷 醇 (9) 在CH₂Cl₂ 中经 CDI 缩合得到目标产物 LOXO-101。合成路线如下所示。

临床研究^[2]

对LOXO-101疗效的评估是基于三个多中心、 开放标签、 单组的临床试验，治疗评价标准主要是测量总缓解率和缓解时间。使用高通量测序 ( NGS ) 或荧光原位杂交( FISH) 确定具有 NTRK 基因融合的患有不可切除或转移性实体瘤患者 55 名，成人患者每天两次口服LOXO-101 100 mg，儿科患者( 18 岁或更小) 按体表 100 mg·m^-2 给药，剂量为 100 mg，每天两次。临床数据表明LOXO-101对具有 NTRK 基因融合的不同类型实体瘤患者治疗总有效率为 75% ，其中完全缓解率为 22%，部分缓解率为53% ; 73% 的患者缓解时间在 6 个月以上，39% 的患者缓解时间可持续一年以上。在 2018 年欧洲肿瘤医学会议上，Loxo Oncology 公布的LOXO-101治疗 TRK 融合癌患者的最新临床资料中，新报告的 67 例 TRK 融合患者总缓解率为 81% ， 其中部分缓解率为 63% ，完全缓解率为 17% ，显示出良好的抗肿瘤活性。LOXO-101最常见的不良反应( ≥20% ) 是疲劳、 恶心、 头晕、 呕吐、 AST 升高、 咳嗽、 ALT 升高、 便秘和腹泻。

主要参考资料

[1] Drilon A , Laetsch T W , Kummar S , et al. Efficacy of Larotrectinib in TRK Fusion-Positive Cancers in Adults and Children[J]. New England Journal of Medicine, 2018, 378(8):731-739.

[2] 刘苗,胡春.拉罗替尼[J].中国药物化学杂志,2019,29(05):416.

[3] HAAS J，ANDREW S W，JIANG Y，et al． Substituted pyrazolo［1，5-a］ pyrimidine compounds as TRK kinase inhibitors:WO2010048314［ P］ ． 2010-04-29．