醋酸戈那瑞林的药性与应用

背景及概述[1]

醋酸戈那瑞林是一种有效的黄体酮释放激素抑制素受体拮抗剂，用于控制卵巢的刺激作用，来预防不成熟卵泡的过早排出，帮助受孕。由于醋酸戈那瑞林的自身物理性质易被胃肠道中的酵素分解破坏，不能通过口服使用，因此常作注射用戈那瑞林制剂，通过皮下或肌肉注射吸收，迅速发挥作用。醋酸戈那瑞林对卵巢癌、前列腺癌、子宫纤维瘤、子宫内膜异位等疾病有较好的疗效，而且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。目前市场上的戈那瑞林制备方法，多采用了液相合成法，这些方法中都用到了毒性较大的如吡啶、氨水等试剂，若用于戈那瑞林的大量制备，定会长期接触此类试剂，对人身体伤害较大；在专利CN105646671A中公开了一种戈那瑞林的纯化方法，该专利的纯化过程较复杂，须对样品进行多次纯化，且需要对目标产物进行减压旋蒸浓缩，工序较多，各个反应中的取样不便，不利于快速大规模的生产。

药性与应用[2]

本品在体内由下垂脑分泌，能刺激垂体前叶分泌促性腺激素FSH、LH。LH能促使男性睾丸间质合成和分泌雄激素。LH、FSH双重作用则可促进卵巢合成和分泌雌激素。连续应用本品，对垂体具有双相作用：开始能促进垂体前叶分泌LH、FSH，使血浆中LH、FSH和性激素升高;久之则可导致垂体中LHRH受体减少，阻止垂体的LH分泌，从而阻断睾丸酮的合成与分泌，达到与睾丸切除相同的效果。在女性则阻断雌激素的合成与分泌而达到与卵巢切除相当的效果。故可治疗激素依赖性前列腺癌与乳腺癌，也适用于子宫内膜异位症。本品系人工合成品，临床主要作为促排卵药，治疗下丘脑性闭经所致的不育、原发性卵巢功能不足，尤其对氯米芬无效者;也用于小儿隐睾及雄激素过多、垂体肿瘤。静脉注射3min达峰值。t1/2约为6min，经肾迅速代谢后排泄。

用药方法[2]

用药有静脉滴注和鼻腔点滴2种方法。静脉滴注：于月经周期第2～4日，5～20μg，共90min。如无排卵(测量基础体温判断)，可重新给药;排卵后肌内注射HCG1500单位，隔3d后再注1500单位。一般2～4个周期即可怀孕。鼻腔给药：用于小儿隐睾症，1～2岁为治疗时机，0.2mg，早、中、晚3次喷用，4周为1个疗程，间隔3个月后可重复。

注意与禁忌[2]

可有多胎妊娠、注射处炎症，偶尔有暂时性阴茎肥大。对苯甲醇过敏者忌用。注射剂于2～8℃遮光保存;粉针剂于8～20℃保存。

药物相互作用[2]

避免与其他促性腺激素释放素、脑垂体激素、性激素制剂同时使用。

规格[2]

注射剂(Pulstim)：500μg/ml;粉针剂(Lutrelef)：0.8mg，3.2mg;喷鼻剂(Crytocur)：每瓶10g溶液中含20mg本品、苯甲醇100mg，相当于100次使用的剂量。

制备[3]

一种特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法，操作步骤如下：

(1)氨基树脂的溶胀：称量取代度为0.3mmol/g的Fmoc-D-Ala-WangResin氨基树脂0.2g，从开口端加入至多肽合成反应器中，取DCM试剂加入至反应器中，使树脂完全浸没在DCM溶剂中，与溶剂充分接触，溶胀2h；用真空泵将反应器中的脱保护溶液抽干，然后加入1/3反应器体积的DMF溶液，置于30r/min的脱色摇床上摇1min，抽干反应器中溶液再加入DMF洗涤，重复操作3次，使用茚三酮显色检测，合格后得到目标氨基树脂；

(2)保护氨基酸的制备：依次将保护氨基酸和HOBT放入离心管中，并加入DMF试剂，得到混合试液；向混合试液溶液中滴加DIEA，混合均匀后即得到所述的活化的保护氨基酸溶液；保护氨基酸从树脂端起算第1-9个氨基酸相对应的保护氨基酸及分子量如下表所示：

以Fmoc-Pro-D-Ala-氨基树脂为例，按照料量称取30mgFmoc-Pro-OH和40mgHBTU于离心管中，加入2mlDMF将其溶解，再取10ulDIEA加入离心管中，混合均匀得到活化的保护氨基酸溶液；

(3)戈那瑞林树脂I的合成：将上述活化的保护氨基酸溶液加到抽干的反应器中，保护氨基酸的投料量为所投氨基树脂摩尔数的1.5倍，再将反应器置于25℃的恒温震荡器中反应25min，微波合成20s。采用上述同样方法，依次缩合第2-9个Fmoc-保护氨基酸，即得到戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂：

Fmoc-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂。

(4)戈那瑞林树脂II的制备：对戈那瑞林前体肽Ⅰ-氨基树脂脱掉D-Nal保护基，进行N端的乙酰化反应，乙酰化反应的试剂为体积比是醋酐：DIEA：DMF＝1：1：4配置的混合溶液，反应液体积为反应器容积的1/3，反应后得到戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂：

Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-氨基树脂；

(5)戈那瑞林粗肽Ⅲ的制备：用真空泵将反应器中的脱保护溶液抽干，然后加入1/3反应器体积的DMF溶液，置于30r/min的脱色摇床上摇1min，抽干反应器中溶液再加入DMF洗涤，重复操作3次。将反应器中的树脂溶液抽干，得到乳胶状的戈那瑞林中间体肽Ⅱ-氨基树脂，配置切割反应的切割试剂100ml，配方为：88mlTFA+5ml茴香硫醚+5ml水+2mlEDT，切割反应温度为20℃，并用-20℃低温预冷的无水乙醚进行多肽粗品的沉降，得到戈那瑞林粗肽Ⅲ：

Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2

(6)戈那瑞林粗肽的粗品收率：切割沉降后的粗品呈乳胶状态，其中含有较多的TFA盐和切割试剂，采用反相高效液相色谱法进行除盐，制备条件为：5umC18制备柱，流动相为A：0.1％乙酸/水，B：0.1％乙酸/乙腈，流速9ml/min，检测波长214nm，按照如下程序进样分析：

称量冻干后的目标样品，质量为68.8mg，经计算粗品收率为91.8％，比现有技术仅60-70％的收率有大幅度提高。

(7)醋酸戈那瑞林的制备：将戈那瑞林粗肽用1％醋酸溶解，加入到强阴离子交换树脂中室温搅拌吸附1h，取出吸附液补加醋酸含量到5％送冻干，经称量得到醋酸戈那瑞林纯品31.2mg，纯度达到99.613％，纯品收率为41.2％；分别称取转盐前后的戈那瑞林多肽各1mg，按药典方法测定醋酸含量，转盐前醋酸含量为1.56％，转盐后醋酸含量为6.9％，符合药典要求(醋酸含量范围4％-8％)，目标物醋酸戈那瑞林产品合格。

主要参考资料

[1] CN201610102107.6一种纯化戈那瑞林的方法

[2] 新全实用药物手册

[3] CN201610925741.X特异性微波合成制备醋酸戈那瑞林的方法