氢-钾ATP酶(H+、K+-ATPASE)试剂盒的使用方法

概述^[1]

H⁺、K⁺－ATPase对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意义。70年代Forte等人首先在牛蛙胃粘膜上分离出一类能被K^＋专一激活而不 被乌本苷抑制的ATPase，即H⁺、K⁺－ATPase。随后Lee·J等人又证明了含有该酶的膜囊泡运动跨膜运输质子的作用，从而为胃酸分泌的机理奠 定了分子学基础。H^＋、K^＋-ATPase定位于胃粘膜壁细胞上，属于第二类质子泵，它通过自身的磷酸化（E1→E2）与去磷酸化（E2→E1）完成的 H^＋/K^＋电中性跨膜离子转运，不断将壁细胞内的质子运输到膜外行使泌酸的功能。

ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

H＋K＋—ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的ATP酶。

产品优点^[1]

1、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。

2、再现性好：变异系数CV=1.7%。

3、回收试验： X =103.3%。

4、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

5、测试面广：可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等，效果均佳。

使用方法^[1]

所需仪器及自备试剂

1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为660nm）

2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃和45℃）3、台式离心机

4、漩涡混匀器

5、微量移液器

样本收集与前处理

红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。

动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。

培养细胞：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

操作流程

1、酶促反应：按说明操作加入样本100l和混合试剂，37℃准确反应10分钟

2、加R7，3500转/分，离心10分钟，取上清

3、定磷：取上清液加入定磷剂，45℃水浴5分钟

4、660nm波长，1cm光径，比色

主要参考文献

[1]刘振中 三甲基氯化锡中毒氯化钾的治疗作用研究及对肾氢钾ATP酶的表达影响。山西医科大学硕士学位论文。