基因定点突变方法

概述^[1]

基因突变是不定向的，是随机的，且突变频率非常低。而通过定点突变技术，可以按照预定设计，对某个已知基因的特定碱基进行定点增删或转换，最终改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，因此基因定点突变技术是蛋白质工程研究中的重要工具。

基因定点突变方法^[2][3]

寡核苷酸介导的定点突变：首先利用转基因技术，将待诱变的目的基因插入到Ｍ１３噬菌体的正链ＤＮＡ上，制备含有目的基因的单链ＤＮＡ。再使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，启动单链ＤＮＡ分子进行复制，这段寡核苷酸引物便成为新合成的ＤＮＡ子链的一个组成部分，将其转入细胞后，经过不断复制，可获得突变的ＤＮＡ分子

盒式定点突变：该方法是利用一段人工合成的含有突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应序列。
ＰＣＲ介导的定点突变：利用ＰＣＲ技术进行定点突变，不仅可以使突变体大量扩增，还可以在所设计的引物５’端加入合适的限制酶酶切位点，为ＰＣＲ扩增产物的克隆提供方便基因编辑技术CRISPR/Cas9构建基因定点突变细胞株。

主要参考文献

1.胡文斌 基因定点突变技术简介。生物学教学２０１３年（第３８卷）第１２期。

2.谭开秀，刘承杰．２０００．基因体外定点突变技术的研究进展．前卫医药杂志，１７（４）：２５６ ～２５７

3.胡美浩．１９９３．定点突变及非定点突变技术的新进展．生物工程进展，１３（６）：1-4