重楼皂苷VII的制备及应用

概述^[1]

重楼甾体皂苷是重楼属植物的主要活性成分，具有抗癌、止血、抗胃粘膜损伤等药理活性。但是，由于重楼甾体皂苷单体化合物的分离、纯化非常困难，是限制其新药研发潜力的瓶颈之一。到目前为止，还没有单一的重楼甾体皂苷为主要成分的新药上市。因此，重楼甾体皂苷单体的规模化制备，对基于单一皂苷的新药研制具有重要意义。

制备^[1]

从滇重楼果皮中大量制备重楼皂苷II和重楼皂苷VII的方法：

1.重楼皂苷II和重楼皂苷VII的提取：干燥的滇重楼果皮(0.50克)粉碎后，采用水、90％乙醇或无水乙醇提取，超声提取，提取时间为30～120分钟，提取温度为25℃～60℃。不同提取条件下，检测到重楼皂苷II和重楼皂苷VII的含量如表1所示。提取液过滤后，在60℃以下蒸干，即得粗提物(0.14～0.27克)。

2.重楼皂苷II和重楼皂苷VII的富集方法：

方法一：取按提取方法5～8所得的滇重楼果皮粗提物6.85g，加100mL水制成混悬液，依次用100mL的乙酸乙酯、正丁醇分别萃取5次。萃取液浓缩后，分别得到乙酸乙酯萃取部分(0.41g)和正丁醇萃取部分(3.22g)。正丁醇萃取部分经SephadexLH-20凝胶柱色谱，经甲醇洗脱后得到富含重楼皂苷II和重楼皂苷VII的部位(1.50g)。

方法二：取按提取方法5～8所得的滇重楼果皮粗提物500g，经D101大孔树脂层析，分别用水洗脱、80％乙醇洗脱、95％乙醇洗脱和丙酮洗脱。其中，80％乙醇洗脱部分浓缩后，得到洗脱物150g。取80％乙醇洗脱部物10g，加100mL水制成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚萃取部位(21.6mg)、乙酸乙酯萃取部位(1.08g)和正丁醇萃取部位(6.80g)，正丁醇萃取部位即为富含重楼皂苷II和重楼皂苷VII的部位。

3.重楼皂苷II和重楼皂苷VII的分离、纯化方法：

方法一：取富含重楼皂苷II和VII的部位1.50g，经制备型HPLC(YMC-Pack，ODS-A色谱柱，直径250×20mm，5μm；流速v＝8.0mL/min；洗脱剂为：0～15min，甲醇-水，87：13；15～30min，甲醇-水，90：10)制备得到化合物重楼皂苷VII(156.0mg，tR＝12.943min)和重楼皂苷II(145.8mg，tR＝24.010min)。

方法二：取富含重楼皂苷II和VII的部位164.6mg，经制备型HPLC(YMC-Pack，ODS-A色谱柱，直径250×20mm，5μm；流速v＝8.0mL/min；洗脱剂为甲醇-水，90：10)制备得到化合物重楼皂苷VII(24.4mg，tR＝11.520min)和重楼皂苷II(27.1mg，tR＝21.320min)。

方法三：取富含重楼皂苷II和VII的部位150.3mg，经制备型HPLC(YMC-Pack，ODS-A色谱柱，直径250×20mm，5μm；流速v＝8.0mL/min；洗脱剂为甲醇-水，87：13)制备得到化合物重楼皂苷VII(26.5mg，tR＝14.040min)和重楼皂苷II(30.0mg，tR＝30.257min)。

通过上述方法，可以大量制备重楼皂苷II和重楼皂苷VII。

应用^[2-3]

重楼皂苷VII对乳腺癌细胞株和小鼠移植瘤的生长均具有良好的抑制作用：(1)重楼皂苷VII在体外对人乳腺癌细胞MCF-7，ZR-75-30，MDA-MB-231均有很强的生长抑制作用，48小时的半数抑制浓度(IC50)值分别为7.72μmol/L、7.16μmol/L、19.83μmol/L；(2)能够诱导乳腺癌细胞发生凋亡；(3)能够对乳腺癌小鼠体内移植瘤产生明显的生长抑制作用，10mg/kg剂量组的抑瘤率也可达到41.63％，可明显抑制荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长，并可提高荷瘤小鼠脾脏指数与胸腺指数。重楼皂苷VII抗乳腺癌活性高且作用明确，同时可配以临床上接受的赋形剂，制备成口服剂型(片剂，酊剂，可分散性粉剂，颗粒剂，乳剂，糖浆剂，硬胶囊，软胶囊等)或者非口服剂型(注射剂，喷雾剂，贴剂等)，制备成临床给药制剂用于乳腺癌的治疗。

此外，重楼皂苷VII对肺癌细胞和动物移植瘤的生长具有良好的抑制作用，具体表现在：(1)在体外对A549和NCI-H1299肺癌细胞有很强的生长抑制作用；(2)能够诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞，并且对细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白有明显影响；(3)对体内移植瘤有明显的抑制作用。

主要参考资料

[1] CN201710587402.X重楼皂苷II和重楼皂苷VII的制备方法

[2] CN201810858227.8一种重楼皂苷VII的新用途

[3] CN201510760859.7重楼皂苷VII在制备抗肺癌药物中的应用