小鼠子宫内膜上皮细胞试剂盒的应用

背景^[1-6]

小鼠子宫内膜上皮细胞试剂盒适用于分离培养小鼠子宫内膜上皮细胞。小鼠子宫内膜上皮细胞试剂盒提供了小鼠子宫内膜的组织分离条件，分离单个细胞的效率较高。此外，试剂盒还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的子宫内膜上皮原代细胞中成纤维细胞的含量。

应用^[7][8]

小鼠子宫内膜上皮细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的子宫内膜上皮细胞。试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠子宫内膜上皮细胞组织解离液（2）小鼠子宫内膜上皮细胞组织处理缓冲液（3）FibrOutTM小鼠子宫内膜上皮细胞培养基。子宫内膜层（endometrium，uterine endome-trium）是指构成哺乳类子宫内壁的一层。对雌激素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜分为功能层和基底层2层。内膜表面2/3为致密层和海绵层统称功能层，受卵巢性激素影响发生周期变化而脱落。基底层为靠近子宫肌层的1/3内膜，不受卵巢性激素影响，不发生周期性的变化。子宫内膜分为致密层、海绵层和基底层3层。

小鼠子宫内膜上皮细胞培养试剂盒可用于玉米赤霉烯酮对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用及机制研究

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)是由镰孢菌属产生的一种非甾类,具有类雌激素活性的真菌毒素。目前,全世界多数国家的农作物中均检出有ZEA的污染。我国多数地区的温度和相对湿度比较适宜霉菌的生长,因此很多农作物及其饲料产品受ZEA的污染严重。大量的研究已经证实,ZEA可以造成生殖器官的形态改变以及功能紊乱、退化。妊娠期的动物食用含ZEA的食物可引起流产、死胎和畸胎。

首先分析体内注射ZEA对青春期小鼠的毒性作用,并初步探讨ZEA对体外培养的小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用及其分子机制,在此基础上,通过RNA-seq测序筛选与ZEA引发的小鼠子宫内膜基质细胞功能衰退相关的关键基因,为进一步揭示ZEA对小鼠子宫内膜基质细胞毒性作用的分子机制奠定基础。

ZEA对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用本研究采用细胞计数法、CCK-8细胞活力检测法、流式细胞仪分析法以及TUNEL法等,研究ZEA对体外培养的小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用。体外培养4～5d,小鼠子宫内膜基质细胞总数及活力达到峰值,随后下降。ZEA处理浓度和时间对小鼠子宫内膜基质细胞的活力有显著影响(P<0.05)。ZEA浓度为100μM时,细胞开始皱缩,但细胞漂浮较少。ZEA浓度为150μM时,细胞皱缩严重,并大量漂浮。随着ZEA浓度增加,与对照组相比,S期的比例显著下降(P<0.05),G2/M期显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。

研究结果表明,ZEA能够引起体外培养的小鼠子宫内膜基质细胞皱缩与漂浮,造成G2/M的阻滞以及细胞内DNA复制受阻,引起细胞凋亡。ZEA对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用的机制研究采用qRT-PCR、Western Blot、酶活性检测、CCK-8活力检测和流式细胞仪分析等方法,分析ZEA对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用机制。随着ZEA处理浓度的增加,p53、Gadd45α、Bax以及Caspase-3和Caspase-9蛋白的mRNA表达量极显著升高(P<0.05),CCNB1、cdc2、Bcl-2基因的表达量显著降低(P<0.05),Bax/Bcl-2的比率极显著升高(P<0.01)。Bax/Bcl-2的蛋白比率,Caspase-3和Caspase-9蛋白的酶活性显著升高(P<0.05)。ROS水平极显著升高(P<0.01),线粒体膜电位极显著下降(P<0.01)。与100μM ZEA相比,添加抑制剂后的细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),细胞活力极显著升高(P<0.01)。

试验结果表明,ZEA通过改变p53、Gadd45α、CCNB1和cdc2基因的表达量,引起小鼠子宫内膜基质细胞的G2/M期阻滞,ZEA通过改变线粒体凋亡途径相关基因Bax和Bcl-2以及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达量,引起小鼠子宫内膜基质细胞发生细胞凋亡。

参考文献

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[7]Natural occurrence of zearalenone in Tunisian wheat grains[J].Chiraz Zaied,Nidhal Zouaoui,Hassan Bacha,Salwa Abid.Food Control.2011(2)

[8]胡进.玉米赤霉烯酮对小鼠子宫内膜基质细胞的毒性作用及机制研究[D].南京农业大学,2016.