二氢菜豆酸的制备

概述^[1]

广金钱草为豆科山蚂蝗属植物，其药用部位为干燥地上部分，主要化学成分为黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。其具有清热除湿，利尿通淋之功效，用于热淋、沙淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少、黄疸尿赤、尿路结石。二氢菜豆酸为白色粉末，其广泛存在于广金钱草药材中，作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品，以及广金钱草及其相关药物制剂质量控制用。现有提取分离二氢菜豆酸的方法和系统亟待改进。

制备^[1]

二氢菜豆酸制备如下：

1）原料：选用豆科植物广金钱草45000-50000重量份，切成5-10cm小段，饮用水清洗掉泥沙，沥干，投料。

2）乙醇提取：80％乙醇回流提取两次，次12倍量2h，第二次10倍量1.5h；合并两次醇提液，回收乙醇至无醇味。

3）减压浓缩：提取浓缩液加水稀释至药材重量的5倍体积；200目滤布过滤；得上柱液；将事先用95％乙醇处理过的净品树脂装柱，纯化水替换；将上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完毕后，静置2h；用纯化水冲洗，洗脱流速3-4BV/h，洗脱量10BV；再用60％乙醇洗脱，洗脱流速2-3BV/h，洗脱量5BV；60％洗脱液合并，打入浓缩罐，回收乙醇至无醇味，至真空干燥箱中50-70℃干燥，得广金原料药300-400重量份。

4）三级色谱分离

A：将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I：乙醇-水混合溶剂20：80，30:70，40:60，60:40梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得20％，30％，40％，60％共四个部位。

B：将色谱分离I得到的20％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ：用乙醇-水，条件为15％等度300min，15-35％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每100-150体积份收集一份，共收集40-50个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离Ⅱ得到的30-40流份合并，进一步用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅲ，用乙醇-水，条件为10％等度30min，10-18％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每100-150体积份收集一份，共收集35-45个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

C：将色谱分离Ⅲ得到的第26-35流份合并，减压浓缩以及放置析出得到二氢红花菜豆酸粗品(纯度为90％)。最后用凝胶色谱分离，即色谱分离Ⅳ：将二氢红花菜豆酸粗品加入至甲醇-水(体积比为2:1)中，超声溶解，所选凝胶色谱为葡聚糖凝胶色谱SephadexG-10，进样体积为10毫升，用纯甲醇冲柱，分份收集，每5体积份收集一份，共收集20-30个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离Ⅳ得到的第8-18流份合并，回收溶剂得到白色的粉末。

5）结构鉴定

经电喷雾电离质谱(ESI-MS)和光谱法(H1-NMR和C13-NMR)对得到白色粉末进行鉴定，结合ESI-MS、H1-NMR和C13-NMR谱图信息推断该化合物的分子式为C15H22O5，确定上述从广金钱草中提取分离出白色粉末为二氢菜豆酸，经HPLC纯度检验，纯度达到98％以上，可作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品、以及作为广金钱草及其相关药物制剂的质量控制使用。

主要参考资料

[1] (CN104945355)从广金钱草中提取分离二氢红花菜豆酸的方法和系统