脱水红花黄色素B的制备方法

背景及概述^[1]

红花又名红蓝花，刺红花，为菊科红花属植物的干燥管状花。红花是我国传统药材，始载于《开宝本草》。《本草纲目》称红花能“活血、润燥、止痛、散肿通经。中医上认为红花味辛、微苦、性温、归心和肝经，具活血通经、散瘀止痛、讲血压、降血脂的功效，用于经闭、痛经、跌打损伤、冠心病、心绞痛和高血压等疾病。红花在现代临床中成为预防和治疗冠心病、心肌梗死和脑血栓等疾病的重要中药。现代药理实验表明：红花能改善心脑血氧供应、减轻缺血性损伤、抗凝血、抗心肌缺血、抑制血小板聚集、抗氧化、抗肿瘤和抗炎等药理作用。红花化学成分复杂，迄今，从红花中分离鉴定100多种化合物，主要含有查尔酮类色素、黄酮类、酚酸类、甾体类及多糖类等化合物。红花黄色素中以羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B（AHSYB）的含量最高，为红花中具有生理活性的主要有效成分。但目前的研究基本集中于羟基红花黄色素A，对AHSYB的提取工艺等报道甚少。

含量测定^[2]

UPLC多指标成分测定红花中的活性成分含量方法，包括如下步骤：

⑴、红花供试品溶液的制备：精密称取红花药材粗粉，精密加水溶解重量，超声处理30～50min，过滤，得供试品滤液；对照品溶液的制备：精密称取对照品6-羟基山奈酚-3，6，7-三-O-葡萄糖苷，羟基红花黄色素，脱水红花黄色素B适量，加甲醇溶解，配制为混合对照品溶液；

⑶、色谱条件：以亚乙基桥杂化颗粒为填充剂，以乙腈为流动相A相，以0.5％甲酸为流动相B相；其体积配比为流动相A相：流动相B相为：2-20：98-80，进行线性梯度洗脱，流速每分钟为0.08～0.12mL，检测波长270～280nm，柱温25～35℃；

⑷、色谱峰测定：将上述步骤(⑴所制得的红花供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到红花有效成分的色谱图，即得。优选的，所述步骤⑴红花供试品溶液制备方法中，精密称取红花药材粗粉，精密加水50mL，超声处理40min，过滤，取滤液，经0.22μm滤膜过滤。

该方法结合高效液相色谱指纹图谱分析方法，采用一测多评法及测定红花提取物中3种有效成分的含量，6-羟基山奈酚-3，6，7-三-O-葡萄糖苷、羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B，且上述3种指标性成分吸收值较大、峰形较好、分离度好、检测时间短。

制备^[3]

一种红花中脱水红花黄色素B的提取和纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

1）温浸法：将红花置于密闭容器内，加入红花重量15-25倍的水，55-85℃下温浸26-38min，过滤，药渣再加原药材重量9-13倍的水，55-85℃下温浸26-38min，滤过，合并滤液，减压浓缩成浓度为0.04-0.08g/mL的红花水提液；

2）大孔吸附树脂的预处理：将HPD-300型大孔树脂置于烧杯中，先用95%乙醇浸泡24h充分溶胀后，湿法装柱，用乙醇通柱淋洗至洗出液加水不显浑浊为止，改用大量水洗，直至无醇味，备用；

3）大孔树脂吸附：取浓度为0.04-0.08g/mL的红花水提液，用稀盐酸调节上样药液pH为2.6-3.2，以流速1.5-2.5mL/min通过HPD-300型大孔树脂柱，用HPLC对流出液进行实时监测，当泄漏时即停止上样；

4）大孔树脂洗脱：用浓度为65-85%的乙醇进行洗脱，控制洗脱流速为1.0-2.0mL/min，洗脱体积为3-5BV，合并洗脱液，即得含脱水红花黄色素B的洗脱液。

主要参考资料

[1] 酶解提取红花中脱水红花黄色素B工艺的优化

[2] CN201810375728.0一种多指标成分UPLC检测红花中有效成分含量方法

[3] CN201610168716.1一种红花中脱水红花黄色素B的提取和纯化方法