格里西轮的药理活性

概述^[1]

格里西轮是一种PPAR配体剂，可以此为有效成分，用于改善胰岛素抗性或改善胰岛素抗性综合征。PPARγ配体具有改善胰岛素抗性，预防和/或改善以2型糖尿病为首的、高胰岛素血症、脂肪代谢异常、肥胖(特别是内脏脂肪型肥胖)、高血压、动脉硬化性疾病等胰岛素抗性综合征有效。化合物专利CN02824015.4首次报道了该化合物。

制备^[1]

将1.2kg甘草(G.ウラレンシス：东北甘草)的微粉碎品浸到5.5L醋酸乙酯中，室温、避光抽提7天后，通过过滤获得抽提液。对其抽提液进行减压浓缩除去溶剂，获得74.0g提取物。将提取物加到硅胶色谱柱上(1500ml)，用氯仿∶甲醇＝19∶1(v/v)进行洗脱，得到级分。对洗脱级分进行减压浓缩除 去溶剂，获得55.4g粗级分。通过反复进行硅胶柱色谱、ODS硅胶柱色谱、装了ODS柱的高效液相色谱、凝胶过滤色谱、分相薄层色谱，对所得粗级分进行纯化，得到格里西轮(80.7mg)。

药理活性^[1]

将CV-1细胞(来源于雄性非洲绿猴肾脏的培养细胞)接种到96孔培养板中，6×103细胞/孔，37℃、5％CO₂条件下培养24小时。应用含10％FBS(胎牛血清)、10ml/L青霉素-链霉素溶液(分别为5000IU/ml，5000ug/ml，GIBCO)、37mg/L抗坏血酸(和光纯药工业株式会社)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium，GIBCO)培养基。用OPTI-MEM(GIBCO)洗涤细胞后，用lipofectamine plus(GIBCO)转化pM-mPPARγ和4×UASg-luc。pM-mPPAR γ是表达结合了酵母来源的转录因子GAL4基因(氨基酸序列1-147)和小鼠 PPARγ配体结合部位基因(氨基酸序列174-475)的嵌合蛋白用的质粒。4×UASg-luc是将GAL4的应答序列(UASg)4次插入到荧光素酶基因上游的报告质粒。转染大约24小时后，换成含样品的培养基，培养24小时(n＝4)。将溶解到二甲基亚砜(DMSO)的样品，无处置对照用DMSO，以1/1000量添 加到培养基中。

用含Ca，Mg的磷酸缓冲生理盐水(PBS+)洗涤细胞后，添加ルツクライト(Packard)，用Topcount-microplate scintillation/luminescene counter(Packard)测定荧光素酶的荧光强度。对照组应用pM(去除了PPARγ配体结合部位基因的质粒)代替 pM-mPPARγ进行与测定组同样地测定。计算出测定组及对照组的荧光强度的均值(n＝4)的比值(测定组/对照组)，将对无处置对照的比活性作为样品的 PPARγ配体活性。测定化合物2（格里西轮）的PPARγ配体活性的结果如下：

主要参考资料

[1] [中国发明] CN02824015.4 过氧化物酶体增殖剂应答性受体配体剂及其制备方法