去氢骆驼蓬碱的制备方法

背景及概述^[1][2]

去氢骆驼蓬碱又名哈尔碱或哈尔明。无色晶体或白色结晶性粉末。熔点262～263℃。不溶于水，且难溶于一般有机溶剂。其盐类具有蓝色荧光。由蒺藜科骆驼蓬种子提取而得。曾用作中枢神经兴奋药。去氢骆驼蓬碱对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统和免疫系统也有强烈作用，还具有抗癌、镇痛、消炎及抗真菌、杀细菌、抗病毒和驱虫等作用。

制备^[1]

取骆驼蓬种子粉碎，称量200g，加50ml5％氨水拌匀氨化20小时后，加1000ml80％甲醇溶液浸泡12小时，滤过，再加600ml80％甲醇浸泡2次，合并提取液滤过，加400ml氯仿溶液搅拌，静置分层后，收集氯仿层，回收氯仿，得8.2g固体物。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按17∶29∶26∶16比例混合，取上相做固定相注入高速逆流色谱仪，转速800r/min，下相为流动相，流速2ml/min，甲醇溶解样品，进样分离样品，收集去氢骆驼蓬碱流分，回收试剂，低温真空干燥，得去氢骆驼蓬碱6.1g，含量经高相液相检测99.3％。

制剂^[3]

CN201610827156.6提供一种去氢骆驼蓬碱长循环磁纳米脂质体的制备方法，将大豆卵磷脂∶二棕榈酰磷脂酰胆碱∶胆固醇∶二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺?聚乙二醇2000按照5~12∶5~12∶5~10∶1~2，溶于体积比为1∶2乙醚和氯仿混合溶剂中形成溶液,将上述溶液旋转蒸发形成薄膜后，加入含磁纳米粒水溶液，水化，即成；或者上述溶液与水相体积3:1比例加入含磁纳米粒水溶液，冰浴超声乳化1~2h后，旋转蒸发成胶态，加水水化，即成。本发明可达到磁靶向和配体主动靶向及长循环多重作用，从而提高去氢骆驼蓬碱在肿瘤中的治疗指数，降低其毒副作用；同时独创性地将去氢骆驼蓬碱用于治疗脑癌的药物中，对于现在无特效药的脑癌拟起到治疗作用。 

联合用药^[4]

CN201710771286.7公开了盐酸去氢骆驼蓬碱联合氟康唑的抗真菌产品及其应用，属于医药技术领域，本发明以多种方法研究氟康唑和盐酸去氢骆驼蓬碱联用对耐药白色念珠菌的联合抗真菌作用。盐酸去氢骆驼蓬碱与氟康唑联合应用时的有效浓度配比：氟康唑：盐酸去氢骆驼蓬碱=1:32（μg/mL，对CA3）或1:16（μg/mL，对CA4），最低抑菌浓度分别为：8μg/mL与0.25μg/mL（对CA3）或0.5μg/mL（对CA4）。盐酸去氢骆驼蓬碱联合氟康唑时，可以增强氟康唑对耐药白色念珠菌的抗菌活性，可以产生协同抗真菌作用，并能够逆转耐药白色念珠菌对氟康唑的耐药性，为新药的开发及老药新用提供了研究方向。

检测^[5]

维药骆驼蓬子为蒺藜科植物骆驼蓬PeganumharmalaL.的种子，仅收载于卫生部药品标准.维吾尔药分册，未收载于中国药典，具有坚固经脉、助阳暖阴和消散寒湿之气的作用。骆驼蓬种子中的化学成分主要为β-咔啉类和喹唑啉类生物碱类成分，如去氢骆驼蓬碱(harmine，HAR)、骆驼蓬碱(harmaline，HAL)、鸭嘴花碱(vasicine，VAS)等29种生物碱。现代药理学表明，HAL、HAR具有抗菌、消炎、止痒、抗原虫及中枢神经系统、心血管系统和对肌肉离子通道及抑制单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶活性等多方面药理。

CN201710823380.2提出了一种检测骆驼蓬子中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的方法。根据本发明的实施例，该方法利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-0.1体积％～0.3体积％磷酸水溶液。发明人发现，该方法具有专属性强、准确度高、重现性好、灵敏度高、耐用性好，以及明显改善色谱峰形和拖尾现象等优点。该方法可用于骆驼蓬子或其提取物的质量控制，促进对骆驼蓬子药用价值的开发和研究。

检测维药骆驼蓬子中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的方法，该方法包括薄层鉴别的定性分析和HPLC法测定骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱含量的定量分析，具体如下：

①薄层鉴别方法的步骤如下：

a)供试品溶液制备：取骆驼蓬子粉末0.2g，加甲醇5mL，超声处理10min，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，取上清液，作为供试品溶液。

b)对照药材溶液制备：取骆驼蓬子对照药材粉末0.2g，加甲醇5mL，超声处理10min，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，取上清液，作为对照药材溶液。

c)对照品溶液制备：取骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱对照品适量，加50体积％甲醇制成每1mL分别含骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱1mg的对照品溶液。

d)照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取空白溶液(甲醇)、对照品溶液6μL、对照药材溶液、供试品溶液各1μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10∶0.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，并分别在紫外灯(254nm、365nm)下检视，然后喷碘化铋钾试液显色。紫外灯254nm下的薄层鉴别谱图、紫外灯365nm下的薄层鉴别谱图和碘化铋钾显色后的薄层鉴别谱图分别见图1、图2和图3。由图1至图3可以看出，供试品色谱中，254nm和365nm紫外灯下，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；显色后，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。

②HPLC法测定骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱含量的步骤如下：

a)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WatersXselectCSHC18，4.6×250×mm,5μm)；以甲醇-0.1体积％磷酸水溶液(体积比为20:80)为流动相，等度洗脱；检测波长为246nm；柱温为25℃；流速0.8ml/min。

b)供试品溶液制备：取骆驼蓬子粉末(过三号筛，筛孔内径355μm±13μm)0.05g，精密称定，置50ml量瓶中，加25体积％甲醇40ml，超声处理15min，放冷，加25体积％甲醇定容至刻度，摇匀，取2ml置10ml量瓶中，加25体积％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

c)对照品溶液制备：取骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱适量，加50体积％甲醇溶解，制成每ml含骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱各10μg的混合对照品溶液。

d)分别精密吸取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，即得。

HPLC法测定骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱含量的空白溶液(25体积％甲醇)谱图见图4，HPLC法测定骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱含量的对照品溶液谱图见图5，HPLC法测定骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱含量的供试品溶液谱图见图6。由图4至图6可以看出，空白溶液对骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的测定无干扰；骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的色谱峰达到完全分离，且具有较大的分离度，骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的理论塔板数和灵敏度也较高；骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的峰形较对称，拖尾因子小于1.5，均能满足定量检测要求。

药理研究^[6]

陈蓓等人研究了去氢骆驼蓬碱干预细粒棘球蚴感染小鼠后血清中细胞因子水平的变化,探索该药物对抗寄生虫感染的免疫应答机制。方法无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴,体外培养发育至成微囊。取10只微囊做空白对照组,另以每鼠50个微囊的剂量腹腔注射接种BALB/c雌性小鼠80只,建立细粒棘球蚴感染小鼠模型。于感染5个月后B超检测成模性。将成模小鼠随机分为模型对照组、阿苯达唑(ABZ 50 mg/kg体重)剂量组、去氢骆驼蓬碱(HM)高(89.4 mg/kg体重)、中(44.7 mg/kg体重)、低(22.35 mg/kg体重)剂量组。连续灌胃给药28 d,期间观察各组小鼠体重变化及生存情况;于治疗结束后,分离各组小鼠囊泡,称量囊湿重,计算囊重抑制率;眶动静脉采血,检测血细胞,比较T淋巴细胞亚群及Th1、Th2类细胞因子变化;制作小鼠肝组织标本,HE染色观察肝脏病理改变。结果实验小鼠成模率为90%,模型组小鼠腹腔、肝脏等部位均出现多个单一性包囊,体重显著增加(P<0.01);HM组小鼠包囊缩小,钙化灶程度较其他治疗组明显,体重显著降低(P<0.01),生存率增高(P<0.01)。各药物治疗组囊湿重显著低于模型组(P<0.01),HM高剂量组囊湿重(4.38±1.03)g与ABZ组(5.84±0.79)g比较差异有统计学意义(P<0.01)。HM低剂量组囊重抑制率63.42%,与ABZ组的63.10%比较差异无统计学意义(P>0.05);中、高剂量组分别为70.12%和72.33%与ABZ组比较差异有统计学意义(P<0.01)。HM处理小鼠外周血CD4~+T细胞水平较模型组显著降低(P<0.01),CD8~+ T细胞水平升高(P<0.01),(IL-2、IFN-γ的水平升高(P<0.01),IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.01);血WBC及Neu、Lym、Eos百分率显著降低(P<0.01)。HE染色检查各药物治疗组肝脏血管周围炎细胞浸润显著减轻。结论去氢骆驼蓬碱显著抑制小鼠细粒棘球蚴的发育,可能通过调节Th1/Th2细胞亚群调整Th1/Th2细胞因子的平衡,改善自身免疫性,减轻炎症反应,从而抑制虫体生长。

主要参考资料

[1][中国发明]CN201110026186.4一种去氢骆驼蓬碱的制备方法

[2]化学物质辞典

[3]CN201610827156.6一种去氢骆驼蓬碱长循环磁纳米脂质体的制备方法

[4]CN201710771286.7盐酸去氢骆驼蓬碱联合氟康唑的抗白色念珠菌产品及其应用

[5]CN201710823380.2检测骆驼蓬子中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的方法

[6]陈蓓,高惠静,巩月红,文丽梅,卢帅,王建华,赵军.去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴感染小鼠外周血Th1/Th2细胞因子的影响[J].中国病原生物学杂志,2019,14(09):1038-1043+1049.